Initiation et imagerie de la cavitation à partir d'agents de contraste d'écho infusés à travers le cathéter EkoSonic

Rapports scientifiques volume 13, Numéro d'article : 6191 (2023) Citer cet article

503 accès

1 Altmétrique

Détails des métriques

L'administration assistée par ultrasons de liposomes échogènes à charge thérapeutique est en cours de développement pour des applications vasculaires utilisant le système endovasculaire EkoSonic. Dans cette étude, des liposomes échogènes ciblés sur la fibrine chargés d'un agent anti-inflammatoire ont été caractérisés avant et après l'infusion à travers un cathéter EkoSonic. L'activité de cavitation a été nucléée par Definity ou des liposomes échogènes chargés de médicament, ciblés sur la fibrine, infusés et insonifiés avec des cathéters EkoSonic. L'imagerie de cavitation passive a été utilisée pour quantifier et cartographier l'activité des bulles dans un fantôme de flux imitant le flux artériel porcin. La cavitation a été maintenue pendant des perfusions de 3 minutes de Definity ou de liposomes échogènes le long de la zone de traitement distale de 6 cm du cathéter. Bien que le cathéter EkoSonic n'ait pas été conçu spécifiquement pour la nucléation par cavitation, l'infusion de liposomes échogènes chargés de médicament peut être utilisée pour déclencher et maintenir l'activité des bulles pour une meilleure administration intravasculaire du médicament.

La maladie artérielle périphérique (MAP) représente un problème clinique difficile affectant 15 à 20 % des personnes de plus de 70 ans en raison de la nature diffuse des dépôts d'athérome dans tout le lit artériel1. La prise en charge de l'AOMI par angioplastie et stents métalliques nus est compliquée par la resténose. L'utilisation de stents à élution médicamenteuse dans l'AOMI a rapporté des résultats décevants à long terme2. Des stratégies innovantes qui empêchent l'accumulation de plaque supplémentaire dans la zone d'intervention, réduisent l'inflammation dans le lit d'athérome environnant et favorisent une circulation sanguine saine peuvent améliorer les résultats cliniques.

L'une de ces stratégies consiste à administrer des agents pour stabiliser l'athérome dans la zone péri-stent3. Les liposomes échogènes (ELIP) sont des agents lipidiques bicouches qui englobent une microbulle monocouche remplie de gaz qui rend les particules sonosensibles4,5. La sensibilité aux ultrasons (US) permet à ELIP d'être visible sur les images US. En outre, ELIP peut être déclenché par les États-Unis pour la libération et l'administration de produits thérapeutiques3,5,6,7,8,9. L'octafluoropropane (OFP) peut être utilisé pour stabiliser l'ELIP contre la dissolution en raison de la faible solubilité de l'OFP dans les solutions aqueuses, y compris le sang4,10. ELIP peut être fonctionnalisé en enduisant la surface de la coque avec des médicaments ou des agents de ciblage3,11. Lorsque les microbulles oscillent dans le système vasculaire, ces effets peuvent ouvrir les jonctions serrées endothéliales12,13,14, induire un microflux15 et augmenter le transport du médicament à travers l'endothélium16,17. Il a été démontré que la pioglitazone (PGN), un médicament anti-inflammatoire, limite l'inflammation dans le système vasculaire18,19,20. L'administration thérapeutique a été démontrée dans un modèle porcin avec une stabilisation de l'athérome résultante en utilisant cette stratégie (Fig. 1)9.

Concept d'administration médicamenteuse par ultrasons de liposomes échogènes chargés de pioglitazone infusés via un cathéter EkoSonic dans le système vasculaire artériel ilio-fémoral porcin.

Des ELIP chargés de pioglitazone et ciblés sur la fibrine avec un nonapeptide personnalisé, OFP-PAFb-PGN-ELIP, sont en cours de développement pour fournir un complément aux stents après une intervention percutanée dans les artères3,21 pour stabiliser l'athérome. Le système endovasculaire EkoSonic (Boston Scientific, Maple Grove, MN, États-Unis) est un cathéter approuvé par la FDA pour la perfusion par ultrasons de produits thérapeutiques dans le système vasculaire périphérique et les artères pulmonaires. Lafond et al. a démontré que Definity perfusé à travers le cathéter EkoSonic pouvait être utilisé pour nucléer une cavitation soutenue pendant 3 min.22,23 la cavitation engendrée par OFP-PAFb-PGN-ELIP infusé et insonifié par le cathéter EkoSonic avant que les essais cliniques puissent commencer.

Le but de cette étude était de déterminer si l'OFP-PAFb-PGN-ELIP infusé peut nucléer une cavitation soutenue avec le cathéter EkoSonic. La distribution de taille, l'atténuation acoustique dépendante de la fréquence et la teneur en PGN dans chaque flacon d'ELIP ont été déterminées avant et après la perfusion à travers le cathéter EkoSonic. L'imagerie de cavitation passive (PCI) le long des six paires de transducteurs actifs distaux du cathéter EkoSonic a été réalisée tout au long des perfusions de 3 minutes de Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP. L'activité de cavitation stable et inertielle a été quantifiée et cartographiée sur la plage de puissances d'entraînement électrique EkoSonic (4 à 47 W) utilisée dans le protocole clinique d'ultrasons pulsés approuvé par la FDA.

La figure 2 illustre (a) la distribution de taille pondérée en nombre et en volume et (b) l'atténuation des ultrasons en fonction de la fréquence pour l'OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitué pipeté directement à partir du flacon et après perfusion à travers des cathéters EkoSonic de 135 cm au repos . Mesuré directement à partir du flacon, 98,5 ± 0,3 % de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP avaient un diamètre inférieur à cinq microns. Après perfusion à travers le cathéter au repos, 98,9 ± 0,1 % étaient inférieurs à cinq microns. Avant la perfusion, la concentration maximale pondérée en nombre de 5,0 × 108 ± 0,6 × 108 microbulles par mL du flacon (moyenne ± écart type, sd, n = 3) correspondait à un diamètre de 1,0 µm. La concentration maximale pondérée en nombre après la perfusion a diminué à 3,8 × 108 ± 0,5 × 108 microbulles par mL (moyenne ± écart-type, n = 3) et le diamètre modal était de 1,0 µm. Le pic de densité numérique pondérée en fonction du volume de OFP-PAFb-PGN-ELIP s'est produit à un diamètre de 1,8 µm et le pic a diminué de 8,5 × 108 ± 1,4 × 108 μm3 par mL du flacon à 5,9 × 108 ± 0,6 × 108 μm3 par mL après perfusion (moyenne ± écart-type, n = 3 chacun). Des tests t de Welch bilatéraux ont été utilisés pour comparer la densité maximale pondérée en nombre (alpha = 0, 05, p = 0, 076) et pondérée en volume (alpha = 0, 05, p = 0, 064). L'OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitué présentait une atténuation de 30 à 40 dB sur une gamme de fréquences de 2 à 25 MHz. La fréquence centrale des paires de transducteurs EkoSonic est de 2,25 MHz. L'atténuation de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitué à 2,2 MHz a diminué de 37,8 ± 4,4 dB/cm à 11,4 ± 1,9 dB/cm après la perfusion. L'OFP-PAFb-PGN-ELIP du flacon a présenté une atténuation maximale à des fréquences de résonance dans la plage de 5,0 à 10,0 MHz et l'OFP-PAFb-PGN-ELIP infusé a présenté une atténuation maximale à 1,6 à 2,2 MHz (maximum ± 1 dB/cm, n = 3 chacun).

( a ) Distribution de taille et ( b ) mesures de spectroscopie d'atténuation de OFP-PAFb-PGN-ELIP à partir du flacon et après perfusion à travers des cathéters EkoSonic. Les distributions de tailles moyennes pondérées en nombre (lignes pleines) et pondérées en volume (lignes point-point-tiret) sont tracées en fonction du diamètre des particules. Les valeurs moyennes d'atténuation sont tracées en fonction de la fréquence. Les barres d'erreur représentent ± 1 écart type (sd), n = 3 flacons chacun.

À l'aide de la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), la dose de PGN a été mesurée directement à partir de trois flacons reconstitués d'OFP-PAFb-PGN-ELIP et de trois flacons supplémentaires après perfusion via le cathéter EkoSonic. La figure 3 représente les doses de PGN de 432,0 ± 128,3 µg et 202,0 ± 51,2 µg (moyenne ± écart-type, n = 3 chacun), quantifiées directement à partir du flacon et après perfusion via des cathéters EkoSonic au repos, respectivement. Avec une corrélation intra-classe de 0,50, les doses de PGN directement à partir du flacon et après perfusion à travers le cathéter étaient corrélées, ce qui nécessite que cette corrélation soit prise en compte pour examiner leurs différences. La différence est significative (alpha = 0,05, p = 0,0007).

Dose moyenne de PGN d'un flacon d'OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitué mesurée directement à partir du flacon et après perfusion via des cathéters EkoSonic. Chaque flacon contient 0,5 ml de solution reconstituée et 10 mg de lipides/ml de solution. Les barres d'erreur représentent ± sd, n = 3 flacons chacun.

La microscopie spatiale à interférence lumineuse (SLIM) de Definity et OFP-PAFb-PGN-ELIP est illustrée à la Fig. 4. Le blanc représente les noyaux de gaz et le noir représente le revêtement lipidique des particules dans le plan d'imagerie. La nature sphérique des microbulles à coque lipidique est révélée par des acquisitions z-stack (Figs supplémentaires. S3 et S4 en ligne). Au fur et à mesure que le plan d'imagerie du microscope se déplace à travers chaque particule, la structure de la coque lipidique et du noyau gazeux est observée. L'anneau de phase extérieur autour des particules est un artefact de diffraction.

Images de microscopie interférentielle lumineuse spatiale (SLIM) de (a, b) Definity et (c, d) OFP-PAFb-PGN-ELIP à l'aide d'un objectif 10 ×. Des images ont été prises de microbulles prélevées directement des flacons (pas de perfusion). Les flèches noires indiquent les coquilles lipidiques et les flèches rouges indiquent les artefacts de diffraction qui apparaissent sous forme d'anneaux blancs.

La figure 5 représente l'énergie de cavitation ultraharmonique et inharmonique nucléée par Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP infusé à travers le cathéter EkoSonic entraîné à des puissances électriques comprises entre 4 et 47 W (n = 3 chacun). Chaque maximum local correspond à l'alignement du réseau L11-5v passif avec l'une des six paires de transducteurs actifs dans le cathéter EkoSonic pendant le retrait. Des émissions de cavitation ultra-harmoniques et inharmoniques ont été maintenues à toutes les puissances d'entraînement électrique. Pour les infusions Definity aux puissances d'entraînement de 18 et 47 W, l'énergie de cavitation inharmonique a dépassé l'énergie de cavitation ultraharmonique. De plus, pour les infusions Definity, l'énergie de cavitation inharmonique augmentait avec la puissance d'entraînement électrique. Cependant, pour les infusions OFP-PAFb-PGN-ELIP à des puissances d'entraînement supérieures à 9 W, les énergies ultraharmoniques et inharmoniques étaient similaires. Dans l'ensemble, Definity a nucléé d'un à deux ordres de grandeur plus d'énergie de cavitation que OFP-PAFb-PGN-ELIP à des puissances d'entraînement équivalentes.

L'énergie de cavitation le long des six paires de transducteurs distaux actifs du cathéter EkoSonic comme OFP-PAFb-PGN-ELIP ou Definity a été infusée. La cavitation moyenne ultraharmonique (vert) et inharmonique (rouge) avec des puissances d'entraînement électrique de (a) 4, (b) 9, (c) 18 et (d) 47 W. Notez que le protocole de post-traitement PCI trace l'ultraharmonique énergie supérieure à l'énergie inharmonique. Les barres d'erreur représentent ± 1 écart type, n = 3 chacune.

La figure 6 montre la distribution spatiale de l'échogénicité des microbulles et de l'énergie de cavitation dans la lumière du tube lorsque Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP ont été perfusés via des cathéters EkoSonic. Les images ont été acquises lorsque le réseau L11-5v était au-dessus de la troisième paire de transducteurs actifs dans le cathéter EkoSonic. Des émissions ultraharmoniques et inharmoniques ont été observées à toutes les puissances d'entraînement électrique pour les deux agents infusés. Les émissions de cavitation nucléées par Definity ont été facilement observées dans toute la lumière à des puissances d'entraînement de 18 W et 47 W et les émissions inharmoniques étaient importantes à 47 W pour la plage dynamique de 55 dB utilisée dans ces images. Des émissions de cavitation nucléées par OFP-PAFb-PGN-ELIP ont été observées dans toute la lumière à 9, 18 et 47 W. Des émissions de cavitation ultraharmoniques et inharmoniques ont été visualisées le long de la zone de traitement du cathéter à toutes les puissances d'entraînement électrique pendant Definity ou OFP-PAFb-PGN -Perfusions ELIP (voir Figs. S1-S2 supplémentaires en ligne). Lorsque le L11-5v a été aligné sur chacune des six paires de transducteurs actifs pendant le retrait, les niveaux d'énergie de cavitation dans les vidéos PCI composites ont été maximisés (c'est-à-dire que les superpositions de couleurs ont été éclaircies). Une quantité plus élevée d'émissions de cavitation ultraharmoniques et inharmoniques a été observée avec Definity plutôt qu'avec les perfusions OFP-PAFb-PGN-ELIP via le cathéter EkoSonic.

Images composites PCI et mode B des émissions ultraharmoniques (vertes) et inharmoniques (rouges) de la cavitation nucléées par Definity infusé ou OFP-PAFb-PGN-ELIP insonifiées par une paire de transducteurs EkoSonic pilotés avec 4, 9, 18 ou 47 W Puissance électrique. Les images en mode B (visualisant l'échogénicité seule) sont présentées dans les lignes 1 et 3, et les images composites correspondantes sont présentées dans les lignes 2 et 4.

La pression hydrodynamique dans la lumière d'administration de médicament du cathéter EkoSonic lorsque les microsphères Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP ont été perfusées est illustrée à la Fig. 7. Une pression hydrodynamique luminale moyenne dans le temps de 468,5 ± 12,5 mmHg ou 434,7 ± 5,6 mmHg (moyenne ± sd, n = 12 chacun) a été mesuré tout au long des perfusions de Definity ou de solution saline, respectivement, à 2,0 mL/min (Fig. 7a). À chaque instant, la pression hydrodynamique luminale pendant les infusions Definity n'était pas statistiquement différente de celle des infusions salines (tests multiples de Kolmogorov-Smirnov, n = 12 par instant, alpha = 0,05, p > 0,05). Une pression moyenne temporelle de 193,6 ± 3,4 mmHg a été maintenue dans la lumière du médicament du cathéter tout au long des perfusions de solution saline à 0,6 ml/min (moyenne ± écart-type, n = 12), mais la pression a augmenté au cours de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP perfusions à 0,6 mL/min (Fig. 7b). À certains moments pendant le retrait, les pressions hydrodynamiques luminales salines et OFP-PAFb-PGN-ELIP étaient statistiquement différentes (tests multiples de Kolmogorov – Smirnov, n = 12 par point de temps, alpha = 0, 05, p <0, 05).

La pression hydrodynamique dans la lumière d'administration de médicament du cathéter EkoSonic lorsque (a) des microsphères Definity ou une solution saline ont été perfusées à 2,0 ml/min ou (b) OFP-PAFb-PGN-ELIP ou une solution saline a été perfusée à 0,6 ml/min, respectivement. Les barres d'erreur représentent ± écart type, n = 12 chacune.

Les microbulles à charge thérapeutique ont été étudiées pour des applications cliniques24, notamment l'administration intravasculaire de médicaments3,25 et la sonothrombolyse8,11. La caractérisation précédente de la distribution de taille des liposomes échogènes chargés thérapeutiquement à l'aide du principe de Coulter a donné une gamme de tailles de particules de 0,6 µm à 7 μm3,8,9,11,25,26. La taille minimale pouvant être mesurée avec cette technique est de 0,6 µm et des particules plus petites sont éventuellement présentes. Les densités numériques maximales des liposomes échogènes à charge thérapeutique dans la littérature vont de 2,6 × 106 à 1,4 × 1012 particules par mL, selon la formulation3,8,9,11,25,26,27. La taille de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP dans cette étude variait principalement de 0, 6 à 3, 0 µm et la densité numérique maximale était de 5, 0 × 108 liposomes échogènes par ml (Fig. 2a), ce qui est cohérent avec les mesures précédentes de charge thérapeutique liposomes échogènes3,8,9,11,26. Chez l'homme adulte, les capillaires ont un diamètre de 4 à 8 µm et les globules rouges un diamètre de 6 à 8 µm28,29. Environ 99% des OFP-PAFb-PGN-ELIP dans cette étude avaient moins de cinq microns de diamètre (Fig. 2a) et passeraient facilement à travers les capillaires. Après des perfusions intra-artérielles de Definity dans les muscles des rats, des microsphères supérieures à cinq microns de diamètre ont été temporairement (~ 10 min) piégées dans les petites artérioles et capillaires30. Parce que la taille d'OFP-PAFb-PGN-ELIP est légèrement plus grande que Definity, de futures études sont nécessaires pour évaluer le passage des perfusions intra-artérielles d'OFP-PAFb-PGN-ELIP à travers les lits capillaires. Des études précliniques pharmacocinétiques et pharmacodynamiques sont également nécessaires pour déterminer la biodistribution des lipides, OFP et PGN après perfusion.

L'atténuation de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP a diminué après la perfusion via le cathéter EkoSonic (Fig. 2b), ce qui est cohérent avec la perte d'atténuation de Definity après la perfusion via le même cathéter22,23. Une agglomération OFP-PAFb-PGN-ELIP a été observée après dilution et infusion, mais seulement après plusieurs heures. Ce type d'agglomération n'a pas été observé pour Definity. Ainsi, la dilution pourrait avoir affecté la stabilité de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP lors des mesures d'atténuation avec la méthode d'impulsion26. La quantité exacte de dilution pendant la perfusion bolus OFP-PAFb-PGN-ELIP et le rinçage salin dans le cathéter était inconnue mais ne dépassait pas 1:10 v/v. La diminution de la densité numérique et de l'atténuation lors de la perfusion (Fig. 2) était probablement due à la rétention ou à la destruction de l'OFP-PAFb-PGN-ELIP dans le cathéter EkoSonic. Nous supposons que la rétention est soit due à une interaction matérielle, soit à une différence de taille entre l'OFP-PAFb-PGN-ELIP et les trous de livraison du cathéter, qui ont un diamètre de 38 à 46 µm. Lafond et al.22,23 ont constaté que le débit de perfusion avait un impact sur la distribution de la taille de Definity perfusant via le cathéter EkoSonic. Talu et al.31 ont rapporté que les microbulles encapsulées dans des lipides et remplies de perfluorocarbone étaient sensibles à la taille de l'orifice et au débit de perfusion. La diminution de la taille de l'orifice et l'augmentation des débits de perfusion ont entraîné une diminution de la densité et du diamètre des microbulles31. L'encrassement des trous d'administration de médicament du cathéter EkoSonic avec des lipides amphiphiles ou des PGN hydrophobes était probablement responsable de l'augmentation de la pression hydrodynamique lors de chaque perfusion OFP-PAFb-PGN-ELIP (Fig. 7b).

De futures études sont nécessaires pour déterminer si la dose totale de PGN délivrée après perfusion via le cathéter EkoSonic est suffisante pour un effet thérapeutique. Klegerman et al.9 ont rapporté que chaque flacon d'OFP-PAFb-PGN-ELIP (également avec un lipide conjugué à la biotine pour permettre l'imagerie fluorescente) contenait 86,9 ± 11,9 µg de PGN/mg de lipide (moyenne ± écart-type). Chaque flacon utilisé dans notre étude contenait 5 mg de lipides et 432,0 ± 128,3 µg de PGN (Fig. 3), soit 86,4 ± 14,2 µg de PGN/mg de lipides, ce qui était cohérent avec les résultats de Klegerman et al.9, pour une formulation liposomale similaire . Dans un modèle porcin de resténose péri-stent, Klegerman et al.9 ont infusé de la nitroglycérine et du PAFb-PGN-ELIP marqué au dinitrophényle à travers le cathéter EkoSonic et ont découvert que l'exposition aux ultrasons augmentait la pénétration du PAFb-PGN-ELIP marqué au dinitrophényle dans les parois artérielles . Kee et al.3 ont également découvert que la perfusion séquentielle de liposomes échogènes chargés d'oxyde nitrique (NO) et de liposomes échogènes chargés de PGN conjugués à un anticorps anti-molécule d'adhésion intercellulaire-1 (ICAM-1) à travers le cathéter EkoSonic était suffisante pour prévenir la néointimale. hyperplasie des artères stentées.

La sortie acoustique des quatre puissances électriques d'entraînement du cathéter EkoSonic était suffisante pour maintenir la cavitation des infusions de Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP le long des six paires de transducteurs distales du cathéter (Fig. 5). Notez que notre stratégie de perfusion nécessitait que les six premières paires de transducteurs soient au repos pour permettre aux agents de contraste d'écho d'être délivrés dans la lumière du tube avant l'exposition aux ultrasons22. La sortie acoustique du cathéter EkoSonic en fonction de la puissance d'entraînement électrique est fournie dans le tableau 1. Lorsque la puissance d'entraînement est passée de 4 à 18 W, l'énergie ultraharmonique et inharmonique a augmenté (Fig. 5). Au-dessus d'une puissance d'entraînement de 18 W, l'énergie inharmonique a également augmenté pour les infusions Definity. Notez que seule l'énergie ultraharmonique en excès de l'énergie inharmonique est tracée, fournissant ainsi une estimation de l'énergie de cavitation stable. L'énergie maximale de cavitation ultraharmonique et inharmonique nucléée par Definity infusé pendant le retrait à une puissance d'entraînement électrique de 9 W était de l'ordre de 1 mJ µV2/MPa2 (Fig. 5). Notez que le niveau d'énergie de cavitation calculé par Lafond et al.22 contenait des erreurs dans l'algorithme de traitement PCI et le code23. La quantité d'énergie de cavitation soutenue par Definity infusé a dépassé celle de OFP-PAFb-PGN-ELIP de 1 à 2 ordres de grandeur, probablement en raison de la différence d'atténuation et d'échogénicité de Definity (un agent de contraste du pool sanguin) par rapport à l'échogène chargé de médicament liposomes (agent théragnostique).

Étonnamment, les émissions ultraharmoniques et inharmoniques indiquant une cavitation stable et inertielle soutenue32, respectivement, sont observées tout au long des infusions Definity entraînées à 47 W, visualisées en jaune dans les images et vidéos composites de cavitation passive (Fig. 6, Fig. Supplémentaires. S1-2 en ligne ). À la même puissance de sortie, une cavitation principalement stable a été visualisée pendant les perfusions OFP-PAFb-PGN-ELIP, bien qu'une certaine cavitation inertielle soit également présente. La quantité de cavitation stable soutenue par le Definity infusé aux puissances d'entraînement de 9, 18 et 47 W était équivalente, bien que la cavitation inertielle ait augmenté avec la puissance d'entraînement (Figs. 5, 6). En ce qui concerne la distribution spatiale de l'activité de cavitation, à mesure que la puissance augmentait, les émissions de cavitation étaient détectées dans un pourcentage plus élevé de la lumière du tube pour les deux agents. Les perfusions de Definity ont émis des émissions de cavitation nucléées dans toute la lumière pendant toute la durée de la perfusion de 3 minutes (Fig. S1 supplémentaire en ligne). La cartographie de l'activité des bulles a le potentiel d'éclairer la relation entre la cavitation (stable et inertielle) et la réponse cellulaire. La contribution spécifique de la cavitation stable et inertielle à l'amélioration de l'administration thérapeutique au-delà de l'endothélium est inconnue à l'heure actuelle.

Il a été démontré que la cavitation médie l'administration de médicaments à travers la barrière hémato-encéphalique33 et améliore l'administration de médicaments aux tissus vasculaires25,34, aux tumeurs35 et au biofilm36. L'interaction mécanique des microbulles acoustiquement actives et des cellules endothéliales a été largement étudiée par Beekers et al.14,37,38,39. Beekers et al. ont observé différents degrés d'ouverture des jonctions serrées en fonction de l'excursion radiale des microbulles individuelles au voisinage des cellules endothéliales. Belcik et al.40 ont montré que l'augmentation du débit induite par la cavitation chez la souris était médiée par la libération dépendante du cisaillement d'adénosine triphosphate (ATP) de l'endothélium et des érythrocytes, et la production subséquente de NO, de prostaglandines et d'adénosine. Müller et al. ont également observé la libération d'ATP et de NO déclenchée par ultrasons des érythrocytes exposés au cathéter EkoSonic aligné sur l'artère fémorale murine41. La production de NO initie le transport paracellulaire au-delà des cellules endothéliales qui tapissent le système vasculaire34, une clé de l'administration de médicaments améliorée par ultrasons. Par conséquent, le maintien de la cavitation dans toute la lumière avec une exposition aux ultrasons du cathéter EkoSonic, noté dans notre étude à des puissances d'entraînement supérieures à 9 W (Fig. 6), améliorera probablement l'administration de PGN. En effet, Kee et al.3 et Klegerman et al.9 ont démontré une amélioration de l'administration au tissu artériel stenté infusé avec ELIP ciblé chargé en PGN et exposé au cathéter EkoSonic entraîné avec une sortie d'entraînement électrique de 9 W (pression de raréfaction maximale de 0,62 MPa, Tableau 1) dans un modèle de porc miniature athéroscléreux. Cependant, l'énergie et le type de cavitation spécifiques requis pour améliorer l'absorption de la pioglitazone et éviter les effets délétères sont inconnus à l'heure actuelle. D'autres études sont nécessaires pour déterminer l'innocuité à long terme de l'administration de pioglitazone par ultrasons dans le tissu artériel.

Une limitation du présent travail était que la sensibilité dépendante de la fréquence du réseau PCI n'était pas calibrée42, ce qui permettrait de comparer quantitativement l'activité de cavitation d'autres laboratoires. La mesure quantitative des émissions d'énergie absolue peut être utilisée pour surveiller les effets biologiques induits par la cavitation dans l'espace43,44 et dans le temps45,46. L'utilisation de l'ICP couplée à une évaluation de l'hyperplasie néointimale après administration de pioglitazone permettrait d'optimiser le choix des paramètres acoustiques pour obtenir ce bioeffet bénéfique. Des publications récentes suggèrent que la cavitation inertielle et la cavitation stable favorisent l'administration de médicaments47,48,49,50. La cavitation inertielle ouvre les jonctions serrées endothéliales12,13,14, et le flux acoustique causé par la cavitation stable ou inertielle51,52,53,54 augmente le transport de médicament à travers l'endothélium16,17. La mauvaise résolution axiale en PCI avec des réseaux linéaires utilisant la technique de formation de faisceaux de retard, de somme et d'intégration22,23,32 peut limiter la capacité de guidage d'image. Il est nécessaire de développer davantage de stratégies pour améliorer la résolution spatiale et la précision du PCI en utilisant le facteur de cohérence de phase55,56 ou la formation de faisceau Capon robuste57.

Le cathéter EkoSonic décrit dans ce travail a été autorisé par la FDA pour l'administration de fluides spécifiés par le médecin, y compris les thrombolytiques, dans le système vasculaire périphérique. Nos données appuient une application émergente de l'administration thérapeutique par ultrasons via une formulation liposomale qui comprend du gaz octafluoropropane qui a nucléé l'activité des bulles pendant des perfusions de 3 minutes. Il est important de noter que l'OFP-PAFb-PGN-ELIP infusé à travers le cathéter EkoSonic a produit une faible quantité de cavitation inertielle et a favorisé une cavitation stable, ouvrant potentiellement la voie à la première étude sur l'homme. Cette stratégie d'administration intra-artérielle de médicaments basée sur un cathéter a le potentiel de stabiliser l'athérome dans la région péri-stent, empêchant l'athérogenèse néo-intimale au moment de l'intervention. D'autres études sont nécessaires pour corréler la quantité et le type de cavitation avec la pénétration du médicament dans le tissu vasculaire avec un effet thérapeutique.

Le cathéter EkoSonic de 5,4 F (1,8 mm de diamètre) utilisé dans cette étude avait une zone de traitement de 12 cm avec 12 paires de transducteurs US de 2 mm de long situés à l'intérieur du cathéter. Les paires de transducteurs étaient espacées de 10 mm et des orifices d'administration de médicament de 38 à 46 µm de diamètre étaient situés à 5 mm distalement de chaque paire de transducteurs (Fig. 8). Une unité programmable fournie par Boston Scientific a été utilisée pour piloter les paires de transducteurs de fréquence centrale de 2,25 MHz avec des impulsions de 15 ms à une fréquence de répétition d'impulsions de 10 Hz. La pression hydrodynamique luminale dans la lumière du médicament du cathéter EkoSonic a été mesurée à l'aide d'un capteur en ligne (PRESS-S-000, PendoTECH, Princeton, NJ, USA) au cours des perfusions Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP.

Schéma du trou d'administration de médicament du cathéter EkoSonic et de la disposition du transducteur. Le long de la zone de traitement de 12 cm du cathéter, les six premières paires de transducteurs à ultrasons étaient au repos tandis que les six paires de transducteurs distales étaient actives et insonifiaient les liposomes échogènes. Le premier trou d'administration de médicament était situé à 0,5 cm après la première des six paires de transducteurs au repos (modifié de Lafond et al.22).

Definity (Lantheus, Billerica, MA, USA) a été préparé conformément à la notice. Chaque flacon Definity (9,2 × 109 microbulles/mL) a été conservé à température ambiante pendant une heure, activé et utilisé dans les dix heures suivant l'activation. S'il n'est pas utilisé dans les cinq minutes, le flacon a été doucement inversé à plusieurs reprises pendant 10 s pour remettre en suspension les microbulles. Pour les mesures de cavitation, les flacons ont été ventilés vers OFP et Definity a été retiré à l'aide d'une aiguille de 18 G connectée à une seringue étanche au gaz de 250 µL (Hamilton Co., Reno, NV, USA). Le Definity a été transféré dans une seringue de 10 mL (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, États-Unis) contenant une solution saline NaCl à 0,9 % à température ambiante de sorte que la solution avant la perfusion ait une concentration de 2,33 × 108 microbulles/mL. Cette concentration de Definity imite la dose de perfusion intraveineuse recommandée par la notice du fabricant.

Des liposomes échogènes ont été fabriqués selon un protocole développé par Klegerman et al.9 sans l'inclusion d'un lipide conjugué à la biotine pour permettre l'imagerie fluorescente. Trois phospholipides, 1,2-distéaroyl-sn-glycéro-3-phosphocholine (DSPC, Avanti Polar Lipids, AL, USA), 1,2-dioléoyl-sn-glycéro-3-phosphoéthanolamine-N-[4-(p- maléimidophényl)butyramide] (MPB-DOPE, Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL, USA), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOPC, Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL, USA) et le cholestérol ( Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL, USA) à un rapport molaire de 52:8:30:10 ont été mélangés. Cent milligrammes du mélange lipidique et 10 mg de PGN (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA) ont été dissous dans 20 ml d'éthanol absolu (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA) et chauffés à 90 ° C pour améliorer la miscibilité du phospholipide et du PGN dans le solvant éthanol. La solution éthanolique a été chargée dans une seringue en verre de 20 ml avec une aiguille de 27 G et injectée dans 115 ml d'eau filtrée à 0,2 µm (Milli-Q Advantage A10, Millipore Sigma, St. Louis, MO, USA) autoclavée (Primus , Omaha, NE, USA) et agité à 1 000 tr/min (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA). La formation spontanée de liposomes unilamellaires se produit dès que la phase organique est en contact avec la phase aqueuse. La dispersion liposomale a été agitée pendant 5 min à température ambiante. La concentration finale en éthanol dans la dispersion liposomale était de 14,8 % v/v. Le solvant résiduel a été éliminé par évaporation rotative (RII, Buchi, Cornaredo, Italie). Après élimination du solvant résiduel, les liposomes ont été remis en suspension avec du mannitol 0,32 M pour produire une concentration de liposomes de 1 mg de PGN/10 mg de lipides/ml.

Pour chaque 60 mg de lipide ELIP chargé en PGN, 1 mg d'un peptide de liaison à la fibrine thiolé a été ajouté dans 1 ml de tampon citrate-phosphate à pH 6, 7. Un nonapeptide sur mesure, PAFb, H-Gly-Pro-Arg-Pro-Pro-Gly-Gly-Gly-Cys-NH2 HCl (GPRPPGGGC), contient le pentapeptide GPRPP58,59 qui se lie à la fibrine, un marqueur de -athérome de stade60,61. La conjugaison a été réalisée avec une liaison thioéther entre le lipide, MPB-DOPE, et le groupe thiol cystéinyle peptidique carboxy-terminal (séparé de la fraction de liaison à la fibrine par un espaceur tri-glycyle). Le pH a été ajusté à 6,5-6,7 avec de l'hydroxyde de sodium 1,0 M, le mélange a été recouvert d'argon et incubé sous agitation à 180-190 tr/min pendant une nuit à température ambiante dans l'obscurité.

Après la réaction, le mélange a été rendu isotonique avec du chlorure de sodium à 6% et centrifugé dans des tubes en polypropylène de 1,5 ml dans une microcentrifugeuse (Eppendorf miniSpin plus, Eppendorf, Hambourg, Allemagne) à 10 000 tr/min pendant 10 min à température ambiante. Les surnageants ont été jetés et les culots ont été lavés deux fois par centrifugation avec 1,0 ml de solution saline tamponnée au phosphate 0,02 M, pH 7,4, par tube. Les culots ont été remis en suspension à plus de 10 mg de lipides/mL avec 0,32 M de D-mannitol et regroupés. La récupération des lipides par rapport au mélange réactionnel a été déterminée par absorption optique à 280 nm (A280) et le culot regroupé a été porté à 10 mg de lipide/ml avec du D-mannitol 0,32 M. Des aliquotes de ce mélange (0,5 mL) ont été distribuées dans des flacons à sertir de 3 mL (Wheaton, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), congelées pendant ≥ 2 h à -80 °C et lyophilisées (FreeZone 6- L, Kansas City, MO, États-Unis) pendant 48 h. Les flacons ont été bouchés avec des inserts en caoutchouc, scellés avec des bouchons à sertir en aluminium et chargés d'octafluoropropane (OFP) à une pression de 1 atm avant l'évaluation et l'utilisation. Les OFP-PAFb-PGN-ELIP ont été expédiés pendant la nuit à l'Université de Cincinnati avec des packs de réfrigérant et utilisés pour des expériences dans les 8,5 mois.

Avant la reconstitution, chaque flacon d'OFP-PAFb-PGN-ELIP a été laissé à température ambiante pendant trois heures, puis ventilé à l'air ambiant à l'aide d'une aiguille de 22 G. À l'aide d'une aiguille de 18 G, 0,5 ml d'eau filtrée à 0,2 micron, saturée en air et à température ambiante (Nanopure, Barnstead Thermolyne, Dubuque, IA, États-Unis) a été lentement ajoutée au flacon. Le flacon a été agité doucement à la main jusqu'à ce que l'OFP-PAFb-PGN-ELIP soit complètement remis en suspension. Les OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitués ont été utilisés dans les 15 minutes.

Chaque cathéter EkoSonic a été amorcé avec une solution saline. Definity a été perfusé dans le port de médicament du cathéter EkoSonic à l'aide d'une pompe à seringue (Legato 180, KD Scientific, Holliston, MA, États-Unis) à 2,0 mL/min. Il a été démontré que le débit de 2,0 ml/min minimise les effets du débit sur la distribution de taille de Definity et l'atténuation acoustique lorsqu'il est perfusé via un cathéter EkoSonic22. Le volume de 0,5 ml d'OFP-PAFb-PGN-ELIP a été perfusé à l'aide de la même pompe à seringue à 0,6 ml/min, le débit de perfusion utilisé par Klegerman et al. dans un modèle porcin de resténose péri-stent9. Une fois la perfusion OFP-PAFb-PGN-ELIP terminée, 2,5 ml de solution saline saturée d'air à température ambiante ont été perfusés à 0,6 ml/min pour pousser l'OFP-PAFb-PGN-ELIP à travers les ports de médicament du cathéter EkoSonic.

Un analyseur de taille de particules Multisizer 4 (Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA) a été utilisé pour mesurer la distribution de taille d'OFP-PAFb-PGN-ELIP avec et sans perfusion à travers le cathéter EkoSonic. Chaque cathéter EkoSonic a été utilisé pour perfuser un seul flacon OFP-PAFb-PGN-ELIP sans piloter les paires de transducteurs à ultrasons22. Pendant l'infusion à travers le cathéter, 3 mL d'effluent ont été recueillis. Après la perfusion, 17 ml de solution saline ont été ajoutés à l'effluent et 0,02 ml de la solution d'effluent de 20 ml ont été ajoutés à 9,98 ml de solution saline. Les aliquotes prélevées directement du flacon OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitué ont été diluées en série dans une solution saline pour obtenir une dilution 1:20 × 103 v/v, similaire à la dilution des aliquotes infusées. La distribution de taille a été mesurée à l'aide d'une ouverture de 30 µm. La distribution granulométrique dans la solution saline a également été mesurée et soustraite des mesures de taille OFP-PAFb-PGN-ELIP. Les valeurs moyennes et d'écart type de distribution de taille (corrigées pour la dilution) ont été évaluées à l'aide de GraphPad Prism (version 9.2.0, San Diego, Californie, États-Unis).

Un système de spectroscopie d'atténuation acoustique26 a été utilisé pour déterminer le coefficient d'atténuation de OFP-PAFb-PGN-ELIP de 2 à 25 MHz directement à partir du flacon ou après infusion à travers des cathéters EkoSonic. La plage de fréquences d'atténuation de 2 à 25 MHz correspond à la bande passante de -20 dB du système. Chaque cathéter EkoSonic a été utilisé pour infuser un seul flacon OFP-PAFb-PGN-ELIP sans activation acoustique des paires de transducteurs, puis jeté. Pendant l'infusion à travers le cathéter, 3 mL d'effluent ont été recueillis. Après l'infusion, 17 ml de solution saline ont été ajoutés à l'effluent. Les aliquots prélevés pour les mesures directement à partir des flacons OFP-PAFb-PGN-ELIP reconstitués ont été dilués en série dans une solution saline pour atteindre une dilution de 1:40 v/v, similaire à la dilution des aliquots infusés. Les échantillons OFP-PAFb-PGN-ELIP ont coulé dans la chambre d'échantillon (CLINI-cell, Mabio, Tourcoing, France) par gravité, et une technique de substitution à large bande a été utilisée pour déterminer le coefficient d'atténuation dépendant de la fréquence de chaque échantillon, en décibels par centimètre26 . L'atténuation moyenne et l'écart type à 2,2 MHz ont été évalués à l'aide de GraphPad Prism (version 9.2.0).

Une norme de contrôle de qualité PGN dans 80 % d'éthanol a été exécutée dans un système HPLC composé d'une colonne YMC ODS-A 5 µm C18 de 6 × 300 mm (Waters, Milford, MA, États-Unis), d'un PC dédié exécutant le logiciel Empower 2, d'un 2996 Détecteur à matrice de photodiodes, un passeur d'échantillons 717 Plus et un contrôleur Delta 600. La phase mobile était composée de 60 % d'acétonitrile et de 40 % de méthanol, le volume d'injection était de 20 µL, la longueur d'onde de détection était de 269 nm et le débit était de 1 mL par minute. Des échantillons OFP-PAFb-PGN-ELIP à une dilution de 1:40 v/v ont été préparés soit directement à partir du flacon, soit infusés via un cathéter EkoSonic au repos. Les échantillons ont ensuite été dilués à 1:5 ou 1:10 v/v dans de l'éthanol à 80 % et passés dans le système HPLC. Deux duplicata HPLC ont été réalisés par dilution d'échantillon (n = 4 par flacon) et la dose de PGN a été calculée à partir de la pente d'une courbe standard composite et ajustée pour la norme de contrôle de qualité PGN, comme AUC/(µg PGN/mL). Mesures répétées, modèle mixte linéaire, des tests Wald Chi-Square de type II ont été effectués dans R (version 4.2.1, R Foundation for Statistical Computing, Vienne, Autriche) pour comparer les mesures PGN directement à partir du flacon et après perfusion via des cathéters EkoSonic .

L'imagerie de phase quantitative (QPI)62 repose sur le principe d'interférence, où les différences de phase entre un échantillon et un champ de référence sont mesurées expérimentalement. En utilisant cette technique, des objets transparents tels que des cellules vivantes et des microbulles à base de lipides sont imagés avec un contraste et une sensibilité élevés en utilisant les informations de phase du champ62. Un module optique (PHI OPTICS INC., Champaign, IL, USA) a été ajouté au port de sortie d'un microscope à contraste de phase (Axio Observer 7, Carl Zeiss Microscopy LLC, White Plains, NY) avec un objectif 10 × (Objective EC " Plan-Neofluar" 10x/0.30 M27, Microscopie Carl Zeiss). Pour chaque acquisition d'image, Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP à une dilution de 1: 1 × 104 v / v ont été immédiatement transférés dans une boîte à fond en verre de 35 mm avec un micropuits de 20 mm (Cellvis LLC, Mountain View, CA ). Une lamelle couvre-objet #0 de 18 mm de diamètre a été placée au-dessus de l'échantillon de gouttelettes pour minimiser le ménisque de l'échantillon.

Un modèle de flux artériel fémoral porcin (Fig. 9) a été adapté de Lafond et al.22. La solution saline contenue dans un réservoir à 37 °C (BW-20B, Lab Companion, Yuseong-gu, Daejeon, République de Corée) a été pompée à travers un tube en latex de 6,35 mm de diamètre intérieur avec une épaisseur de paroi de 0,79 mm à l'aide d'une pompe pulsatile (modèle 1407 , Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA) avec un débit volumétrique moyen dans le temps de 100 mL/min. Un capteur de débit (ME6PXN, Transonic, Ithaca, NY, USA) connecté à un module de débit (TS410, Transonic) a permis de confirmer le débit moyen dans le temps de 100 mL/min avant la perfusion d'agent de contraste d'écho, ce qui a perturbé le fonctionnement du débit capteur. Le module de débit était connecté à une carte d'acquisition de données (DAQ) (PL3508 PowerLab 8/35, ADInstruments, Bella Vista NSW 2153, Australie). La pression hydrodynamique a été mesurée à l'aide d'un capteur en ligne (PRESS-S-000, PendoTECH, Princeton, NJ, USA) au cours de l'infusion de Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP. Le capteur de pression était connecté à la carte DAQ via un capteur de pont OMEGA (DMD-475, OMEGA Engineering, Inc., Stamford, CT, USA). Le logiciel LabChart (version 8.1.11, ADInstruments, Bella Vista NSW 2153, Australie) a été utilisé pour enregistrer les données de débit volumétrique et de pression hydrodynamique, et MATLAB (R2018b, The MathWorks Inc., Natick, MA, USA) a été utilisé pour tracer les données . Un réseau linéaire L11-5v (Verasonics, Kirkland, WA, USA) avec une vue transversale du tube en latex a été connecté à un scanner Vantage 256 US (Verasonics) pour obtenir à la fois des images en mode B et des données PCI32.

Schéma de la configuration du fantôme de flux pour l'imagerie de cavitation passive. Une solution saline à 37 ° C a été pompée du réservoir, sur le cathéter, vers la postcharge et vers le réservoir de déchets. Au cours de chaque essai expérimental, le cathéter a été retiré dans le tube de sorte que le réseau L11-5v balaye les paires de transducteurs actifs (modifié de Lafond et al.22).

Le réseau linéaire L11-5v a été positionné de sorte que le centre de la lumière du tube soit à 4 mm au-delà du foyer naturel du réseau (18 mm). L'emplacement et l'étendue temporelle de la cavitation ultraharmonique et inharmonique ont été acquis pour Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP infusé à travers le cathéter EkoSonic, entraîné à une puissance électrique moyenne d'impulsion de 4, 9, 18 ou 47 W. Le protocole clinique d'ultrasons pulsés approuvé par la FDA utilisé par le cathéter EkoSonic varie entre 9 et 47 W. Le tableau 1 fournit les mesures du champ de pression de raréfaction maximale à la surface du cathéter EkoSonic en fonction de la puissance d'entraînement électrique, ainsi que l'indice mécanique , MI. Notez cependant que les hypothèses sur les conditions de cavitation intégrées dans la définition de l'IM ne sont pas remplies63. Une durée d'impulsion de 15 ms dépasse l'hypothèse de cycle unique nécessaire pour négliger la diffusion redressée63. Pour permettre la perfusion d'agent de contraste à partir des six premiers orifices d'administration de médicament avant l'exposition aux ultrasons, seules les six paires de transducteurs distales ont été activées acoustiquement. Les données PCI ont été acquises sur les six paires de transducteurs distales, car les six paires distales ont été utilisées par Kee et al.3 pour délivrer un ELIP chargé de PGN ciblé sur ICAM-1 afin de prévenir l'athérogenèse néointimale péri-stent dans un modèle porcin de maladie artérielle athérosclérotique .

Le cathéter EkoSonic a été amorcé avec une solution saline à température ambiante, attaché à un dispositif de retrait Volcano R100 (Philips, Koninklijke, NV, USA) et inséré dans le tube d'écoulement à l'aide d'une valve hémostatique. Le cathéter a été aligné de sorte que le réseau L11-5v soit positionné 10 mm avant les six paires de transducteurs distales. Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP a été perfusé et les données ont été acquises (voir Fig. S5 supplémentaire en ligne). L'analyse des données a été réalisée dans MATLAB (R2018b) et GraphPad Prism (version 9.2.0). La distribution de la pression hydrodynamique luminale dans le temps pendant les perfusions de Definity et de solution saline (2 ml/min) a été évaluée pour la normalité à l'aide du test de Kolmogorov-Smirnov. Ensuite, plusieurs tests de Kolmogorov-Smirnov avec une méthode en deux étapes de Benjamini, Krieger et Yekutieli64 ont été utilisés pour comparer les pressions hydrodynamiques luminales à chaque instant. Les mêmes méthodes statistiques ont été utilisées pour comparer les données de pression hydrodynamique luminale OFP-PAFb-PGN-ELIP et saline (0, 6 ml / min).

L'activité de cavitation a été évaluée en acquérant des données en mode B et PCI pendant les perfusions Definity ou OFP-PAFb-PGN-ELIP via le cathéter EkoSonic. Un dispositif de retrait a été utilisé pour déplacer le cathéter à travers le plan d'imagerie PCI entre la sixième paire de transducteurs au repos et 20 mm au-delà de la paire de transducteurs actifs la plus distale (Fig. 8). Un taux de retrait de 0,5 mm/s a été utilisé pour les perfusions Definity et un taux de retrait de 1 mm/s a été utilisé pour les perfusions OFP-PAFb-PGN-ELIP afin de capturer la durée de la cavitation engendrée par les deux schémas. Les émissions acoustiques ont été enregistrées toutes les 1,0 ± 0,2 s (moyenne ± sd). Les spectres d'émission acoustique, y compris les inharmoniques, les sous-harmoniques et les ultra-harmoniques, ont été indépendamment formés par faisceau22,23 sur un ordinateur personnel (Dell Precision 5820, Round Rock, TX, États-Unis) à l'aide d'un code MATLAB personnalisé (R2018b). Les données de cavitation des perfusions salines ont servi de référence et ont été soustraites des données de cavitation Definity et OFP-PAFb-PGN-ELIP.

La formation de faisceau PCI, les calculs d'énergie de cavitation et les formulations d'images composites ont été adaptés de Lafond et al.22 avec des corrections dans l'algorithme et le code de formation de faisceau23. L'acquisition des données a commencé immédiatement après le déclenchement des paires de transducteurs EkoSonic. Les ensembles de données acquis ont été divisés en fenêtres de 288 µs pour minimiser les fuites spectrales65, et la deuxième fenêtre de 288 µs du signal non formé en faisceau a été traitée pour éviter le transitoire initial22. La formation de faisceaux a été réalisée dans le domaine de Fourier, intégrant l'énergie sur des bandes de 40 kHz centrées sur les fréquences sous-harmoniques et ultra-harmoniques entre 4,68 et 10,52 MHz. L'énergie de cavitation du signal discrétisé a été calculée à l'aide de l'équation. 1 dans Lafond et al.22 avec corrections23. Pour chaque impulsion, des images d'émission ultraharmoniques et inharmoniques ont été formées en faisceau selon l'Eq. 2 dans Lafond et al.22 avec des valeurs d'énergie négatives fixées à zéro afin de tirer parti de la réduction du speckle composé en fréquence66. Le niveau d'énergie de cavitation maximal dans les images PCI composites a été défini sur les émissions inharmoniques maximales des infusions Definity, et la plage dynamique a été définie sur 55 dB re 1 mJ µV2/MPa2 pour englober les émissions minimales des infusions OFP-PAFb-PGN-ELIP . L'énergie totale de cavitation a été calculée selon l'équation. 8 dans Lafond et al22,23 avec des valeurs d'énergie négatives également forcées à zéro.

Les ensembles de données sont disponibles auprès de l'auteur correspondant sur demande raisonnable.

Aday, AW & Matsushita, K. Épidémiologie de la maladie artérielle périphérique et de la maladie polyvasculaire. Circ. Rés. 128, 1818–1832. https://doi.org/10.1161/Circresaha.121.318535 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Duda, SH et al. Stents à élution de sirolimus pour le traitement de la maladie obstructive de l'artère fémorale superficielle. Circulation 106, 1505-1509. https://doi.org/10.1161/01.Cir.0000029746.10018.36 (2002).

Article CAS PubMed Google Scholar

Kee, PH et al. Stabilisation de la resténose péri-stent à l'aide d'un nouveau support thérapeutique. JACC-Basic Transl. Sci. 5, 1–11. https://doi.org/10.1016/j.jacbts.2019.09.005 (2020).

Article PubMed Google Scholar

Szijjarto, C., Rossi, S., Waton, G. & Krafft, MP Effets des gaz perfluorocarbonés sur la taille et les caractéristiques de stabilité des microbulles revêtues de phospholipides : effet osmotique par rapport à la stabilisation du film interfacial. Langmuir 28, 1182–1189. https://doi.org/10.1021/la2043944 (2012).

Article CAS PubMed Google Scholar

Buchanan, KD, Huang, S., Kim, H., Macdonald, RC et McPherson, DD Compositions de liposomes échogènes pour une rétention accrue de la réflectivité des ultrasons à température physiologique. J.Pharm. Sci. 97, 2242–2249. https://doi.org/10.1002/jps.21173 (2008).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Huang, S. & McPherson, DD in Cancer Theranostics (eds X. Chen & S. Wong) Ch. 16, 269–283 (Academic Press, 2014).

Britton, GL et al. Administration de gaz thérapeutique in vivo pour la neuroprotection avec des liposomes échogènes. Circulation 122, 1578-1587. https://doi.org/10.1161/CIRCULATIONAHA.109.879338 (2010).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Shekhar, H. et al. Efficacité thrombolytique in vitro de liposomes échogènes chargés d'activateur tissulaire du plasminogène et de gaz octafluoropropane. Phys. Méd. Biol. 62, 517–538. https://doi.org/10.1088/1361-6560/62/2/517 (2017).

Article CAS PubMed Google Scholar

Klegerman, ME et al. Démonstration de l'administration thérapeutique par ultrasons de liposomes échogènes chargés de pioglitazone ciblés sur la fibrine dans le lit artériel pour l'atténuation de la resténose péri-stent. J. Cible médicamenteuse. 31, 109-118. https://doi.org/10.1080/1061186x.2022.2110251 (2023).

Article CAS PubMed Google Scholar

Kabalnov, A. et al. Dissolution de microbulles multi-composants dans la circulation sanguine : 2. Expérience. Méd échographie. Biol. 24, 751–760. https://doi.org/10.1016/S0301-5629(98)00033-7 (1998).

Article CAS PubMed Google Scholar

Shekhar, H. et al. Caractérisation in vitro des agents de sonothrombolyse et d'échocontraste pour traiter l'AVC ischémique. Sci. Rep. 9, 1. https://doi.org/10.1038/s41598-019-46112-z (2019).

Article ADS CAS Google Scholar

Chen, H., Brayman, AA, Kreider, W., Bailey, MR et Matula, TJ Observations de la traduction et de la projection de microbulles activées par ultrasons dans les microvaisseaux mésentériques. Méd échographie. Biol. 37, 2139-2148. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2011.09.013 (2011).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Silvani, G. et al. Ouverture jonctionnelle réversible induite par la cavitation dans une couche endothéliale artificielle. Petit 15, 1. https://doi.org/10.1002/smll.201905375 (2019).

Article CAS Google Scholar

Beekers, I. et al. Ouverture des contacts cellule-cellule endothéliale due à la sonoporation. J. Contrôle. Version 322, 426–438. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2020.03.038 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

Bhatnagar, S., Schiffter, H. & Coussios, CC Exploitation du microflux induit par la cavitation acoustique pour améliorer le transport moléculaire. J.Pharm. Sci.-Us 103, 1903–1912. https://doi.org/10.1002/jps.23971 (2014).

Article CAS Google Scholar

Haworth, KJ et al. Échographie Trans-Stent en mode B et imagerie de cavitation passive. Méd échographie. Biol. 42, 518–527. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2015.08.014 (2016).

Article PubMed Google Scholar

Grisanti, G. et al. Une plate-forme microfluidique pour l'administration de médicaments améliorée par cavitation. Micromachines-Bâle 12, 1. https://doi.org/10.3390/mi12060658 (2021).

Article Google Scholar

Zhang, MD et al. La thrombose de la plaque est réduite en atténuant l'inflammation de la plaque avec la pioglitazone et est évaluée par tomographie par émission de positrons au fluorodésoxyglucose. Cardiovasculaire. Là. 33, 118-126. https://doi.org/10.1111/1755-5922.12119 (2015).

Article ADS CAS PubMed Google Scholar

Onursal, C. et al. La pioglitazone protège les greffons veineux du stress oxydatif, de l'inflammation et du dysfonctionnement vasculaire. Athérosclérose 315, e268 (2020)

Vucic, E. et al. La pioglitazone module l'inflammation vasculaire chez les lapins athéroscléreux, évaluation non invasive avec FDG-PET-CT et IRM dynamique à contraste amélioré. JACC-Cardiovasc. Imag. 4, 1100–1109. https://doi.org/10.1016/j.jcmg.2011.04.020 (2011).

Article Google Scholar

Huang, SL et al. Liposomes échogènes chargés d'oxyde nitrique pour l'administration d'oxyde nitrique et l'inhibition de l'hyperplasie intimale. Confiture. Coll. Cardol. 54, 652–659. https://doi.org/10.1016/j.jacc.2009.04.039 (2009).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lafond, M. et al. Émissions de cavitation nucléées par Definity Infused à travers un cathéter Ekosonic dans un fantôme de flux. Échographie Avec. Biol. 47 , 693–709. https://doi.org/10.1016/j.ultramedbio.2020.10.010 (2021).

Article PubMed Google Scholar

Escudero, DS et al. Rectificatif à "Émissions de cavitation nucléées par infusion définitive à travers un cathéter EkoSonic dans un fantôme de flux" [vol 47, p 693, 2021]. Échographie Avec. Biol. 49 , 410–414. https://doi.org/10.1016/j.ultramedbio.2022.09.012 (2023).

Article PubMed Google Scholar

Kooiman, K. et al. Noyaux de cavitation sensibles aux ultrasons pour la thérapie et l'administration de médicaments. Méd échographie. Biol. 46, 1296–1325. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2020.01.002 (2020).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Sutton, JT, Raymond, JL, Verleye, MC, Pyne-Geithman, GJ & Holland, CK Les ultrasons pulsés améliorent l'apport d'oxyde nitrique des liposomes à bulles au tissu carotidien porcin ex vivo. Int. J. Nanomed. 9, 4671–4683. https://doi.org/10.2147/Ijn.S63850 (2014).

Article CAS Google Scholar

Raymond, JL et al. Mesures d'atténuation à large bande d'agents de contraste ultrasonores à coque phospholipidique. Méd échographie. Biol. 40, 410–421. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2013.09.018 (2014).

Article PubMed Google Scholar

Kandadai, MA, Meunier, JM, Hart, K., Holland, CK & Shaw, GJ Liposomes échogènes chargés de plasmine pour la thrombolyse médiée par ultrasons. Trad. AVC Res. 6, 78–87. https://doi.org/10.1007/s12975-014-0376-4 (2015).

Article CAS PubMed Google Scholar

Diez-Silva, M., Dao, M., Han, JY, Lim, CT & Suresh, S. Forme et caractéristiques biomécaniques des globules rouges humains en bonne santé et malades. Mme Taureau. 35, 382–388. https://doi.org/10.1557/mrs2010.571 (2010).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Popel, AS & Johnson, PC Microcirculation et hémorhéologie. Annu. Rév. Fluid Mech. 37, 43–69. https://doi.org/10.1146/annurev.fluid.37.042604.133933 (2005).

Article ADS MathSciNet PubMed PubMed Central MATH Google Scholar

Lindner, JR, Song, J., Jayaweera, AR, Sklenar, J. & Kaul, S. Rhéologie microvasculaire des microbulles de définition après administration intra-artérielle et intraveineuse. Confiture. Soc. Échocardiogr. 15, 396–403. https://doi.org/10.1067/mje.2002.117290 (2002).

Article PubMed Google Scholar

Talu, E., Powell, RL, Longo, ML et Dayton, PA La taille de l'aiguille et le taux d'injection ont un impact sur la population d'agents de contraste à microbulles. Méd échographie. Biol. 34, 1182–1185. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2007.12.018 (2008).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Haworth, KJ, Bader, KB, Rich, KT, Holland, CK & Mast, TD Imagerie quantitative de la cavitation passive dans le domaine fréquentiel. IEEE Trans. Ultrason. Ferroélectr. Fréq. Contrôle 64, 177–191. https://doi.org/10.1109/Tuffc.2016.2620492 (2017).

Article PubMed Google Scholar

Hynynen, K., McDannold, N., Vykhodtseva, N. & Jolesz, FA Ouverture focale guidée par IRM non invasive de la barrière hémato-encéphalique chez le lapin. Radiologie 220, 640–646. https://doi.org/10.1148/radiol.2202001804 (2001).

Article CAS PubMed Google Scholar

Sutton, JT, Haworth, KJ, Pyne-Geithman, G. & Holland, CK Administration de médicaments par ultrasons pour les maladies cardiovasculaires. Avis d'expert. Déliv. 10, 573–592. https://doi.org/10.1517/17425247.2013.772578 (2013).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Yemane, PT et al. L'effet de la sonication sur l'extravasation et la distribution des nanoparticules et des dextranes dans le tissu tumoral imagé par microscopie multiphotonique. 2018 IEEE International Ultrasonics Symposium (IUS) (2018).

Lattwein, KR et al. Une étude in vitro de preuve de principe du sonobactéricide. Sci. Rep. 8, 1. https://doi.org/10.1038/s41598-018-21648-8 (2018).

Article CAS Google Scholar

Beekers, I. et al. Imagerie haute résolution des fluctuations intracellulaires du calcium causées par des microbulles oscillantes. Méd échographie. Biol. 46, 2017-2029. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2020.03.029 (2020).

Article PubMed Google Scholar

van Rooij, T. et al. Viabilité des cellules endothéliales après sonoporation par ultrasons : influence du ciblage, de l'oscillation et du déplacement des microbulles. J. Contrôle. Version 238, 197–211. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2016.07.037 (2016).

Article CAS PubMed Google Scholar

van Rooij, T. et al. Rectificatif à "Viabilité des cellules endothéliales après sonoporation par ultrasons : influence du ciblage, de l'oscillation et du déplacement des microbulles" [vol 238, pg 197, 2016]. J. Contrôle. Version 332, 502–502. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2021.03.011 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Belcik, JT et al. L'augmentation du flux sanguin musculaire par cavitation ultrasonore est médiée par l'ATP et la signalisation purinergique. Circulation 135, 1240–1252. https://doi.org/10.1161/Circulationaha.116.024826 (2017).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Muller, MA et al. Effets vasculaires régionaux et conduits des cathéters endovasculaires à ultrasons. Méd échographie. Biol. 46, 2361–2369. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2020.05.008 (2020).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Gray, MD, Lyka, E. & Coussios, CC Effets de diffraction et compensation en cartographie acoustique passive. IEEE Trans. Ultrason. Ferroélectr. Fréq. Contrôle 65, 258–268. https://doi.org/10.1109/Tuffc.2017.2778509 (2018).

Article PubMed Google Scholar

Yang, YH et al. Peinture de dose de cavitation pour la perturbation de la barrière hémato-encéphalique induite par ultrasons focalisés. Sci. Rep. 9, 1. https://doi.org/10.1038/s41598-019-39090-9 (2019).

Article ADS CAS Google Scholar

Smith, CAB & Coussios, CC Évaluation spatio-temporelle de la sécurité cellulaire des thérapies basées sur la cavitation par cartographie acoustique passive. Méd échographie. Biol. 46, 1235-1243. https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2020.01.009 (2020).

Article PubMed Google Scholar

Rich, KT, Holland, CK, Rao, MB & Mast, TD Caractérisation de la puissance acoustique rayonnée par cavitation à l'aide de la correction de diffraction. J.Acoust. Soc. Suis. 144, 3563-3574. https://doi.org/10.1121/1.5083831 (2018).

Article ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Arvanitis, CD, Livingstone, MS, Vykhodtseva, N. & McDannold, N. Rupture contrôlée de la barrière hémato-encéphalique induite par les ultrasons à l'aide de la surveillance passive des émissions acoustiques. PLoS ONE 7, 1. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045783 (2012).

Article CAS Google Scholar

Bhatnagar, S., Schiffter, H. & Coussios, CC Exploitation du microflux induit par la cavitation acoustique pour améliorer le transport moléculaire. J.Pharm. Sci. 103, 1903–1912. https://doi.org/10.1002/jps.23971 (2014).

Article CAS PubMed Google Scholar

Chettab, K. et al. Preuve de concept : livraison de protéines dans les érythrocytes humains par cavitation stable. Mol. Pharmacie. 19, 929–935. https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.1c00907 (2022).

Article CAS Google Scholar

Chowdhury, SM, Abou-Elkacem, L., Lee, T., Dahl, J. & Lutz, AM Administration thérapeutique par ultrasons et microbulles : mécanismes sous-jacents et perspectives d'avenir. J. Contrôle. Version 326, 75–90. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2020.06.008 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

Deprez, J., Lajoinie, G., Engelen, Y., De Smedt, SC & Lentacker, I. Ouvrir des portes avec des ultrasons et des microbulles : battre les barrières biologiques pour favoriser l'administration de médicaments. Adv. Livraison de médicaments. Rév. 172, 9–36. https://doi.org/10.1016/j.addr.2021.02.015 (2021).

Article CAS Google Scholar

Elder, SA Cavitaton microstreaming. J.Acoust. Soc. Suis. 31, 54–64 (1959). https://doi.org/10.1121/1.1907611

Marmottant, P. & Hilgenfeldt, S. Déformation et lyse contrôlées des vésicules par des bulles oscillantes simples. Nature 423, 153-156. https://doi.org/10.1038/nature01613 (2003).

Article ADS CAS PubMed Google Scholar

Nyborg, WL Microflux ultrasonique et phénomènes associés. Br. J. Cancer Suppl. 5, 156-160 (1982).

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kwan, JJ et al. Nanocups propulsées par ultrasons pour l'administration de médicaments. Petit 11, 5305–5314. https://doi.org/10.1002/smll.201501322 (2015).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Salido, NG, Haworth, KJ, Lafond, M., Genstler, CG & Holland, CK au 19e Symposium international sur l'échographie thérapeutique 39 (Barcelone, Espagne, 2019).

Haworth, KJ, Lafond, M., Salido, NG et Holland, CK dans le 21e Symposium international annuel sur l'échographie thérapeutique (Canada, 2022).

Google Scholar

Coviello, C. et al. Cartographie acoustique passive utilisant une formation de faisceau optimale dans la surveillance de la thérapie par ultrasons. J.Acoust. Soc. Suis. 137, 2573-2585. https://doi.org/10.1121/1.4916694 (2015).

Article ADS PubMed Google Scholar

Aruva, MR, Daviau, J., Sharma, SS & Thakur, ML Imagerie thromboembolique avec le peptide Tc-99m avide de fibrine : évaluation chez le porc. J. Nucl. Méd. 47, 155-162 (2006).

CAS PubMed Google Scholar

Laudano, AP & Doolittle, Dérivés de peptides synthétiques RF qui se lient au fibrinogène et empêchent la polymérisation des monomères de fibrine. P. Natl. Acad. Sci. États-Unis 75, 3085–3089. https://doi.org/10.1073/pnas.75.7.3085 (1978).

Article ADS CAS Google Scholar

Badimon, L. & Vilahur, G. Formation de thrombose sur lésions athérosclérotiques et rupture de plaque. J. Stagiaire. Méd. 276, 618–632. https://doi.org/10.1111/joim.12296 (2014).

Article CAS PubMed Google Scholar

Smith, EB Fibrinogène, fibrine et produits de dégradation de la fibrine en relation avec l'athérosclérose. Clin. Hématol. 15, 355–370. https://doi.org/10.1016/S0308-2261(18)30021-3 (1986).

Article CAS PubMed Google Scholar

Park, Y., Depeursinge, C. & Popescu, G. Imagerie de phase quantitative en biomédecine. Nat. Photonics 12, 578–589. https://doi.org/10.1038/s41566-018-0253-x (2018).

Article ADS CAS Google Scholar

Apfel, RE & Holland, CK Évaluer la probabilité de cavitation à partir d'ultrasons diagnostiques à impulsions courtes et à faible cycle de service. Méd échographie. Biol. 17, 179–185. https://doi.org/10.1016/0301-5629(91)90125-G (1991).

Article CAS PubMed Google Scholar

Benjamini, Y., Krieger, AM & Yekutieli, D. Procédures d'augmentation linéaire adaptative qui contrôlent le taux de fausses découvertes. Biometrika 93, 491–507. https://doi.org/10.1093/biomet/93.3.491 (2006).

Article MathSciNet MATH Google Scholar

Mast, TD et al. Émissions acoustiques lors d'une ablation en masse par ultrasons à 3,1 MHz in vitro. Méd échographie. Biol. 34, 1434-1448 (2008). https://doi.org/10.1016/j.ultrasmedbio.2008.02.007

Szabo, TL Imagerie diagnostique par ultrasons : de l'intérieur vers l'extérieur. Deuxième édition, 399 (Academic Press, 2014).

Télécharger les références

Ce travail a été financé par les National Institutes of Health des États-Unis par le biais de la subvention R01 HL135092 à l'Université de Cincinnati, Boston Scientific Inc. et l'Université du Texas Health Science Center Houston pour étudier l'administration de médicaments améliorée par ultrasons à l'aide du système endovasculaire EkoSonic avec une charge thérapeutique liposomes échogènes. Les auteurs tiennent à remercier Boston Scientific Inc pour la fourniture de l'unité de contrôle et des cathéters du système endovasculaire EkoSonic. Nous sommes reconnaissants à Catalin Chiritescu, PhiOptics Inc., pour avoir aidé à l'acquisition d'images SLIM, Marepalli B. Rao pour l'aide à l'analyse statistique, et Hyunggun Kim pour l'illustration de la figure 1.

Maxime Lafond

Present address: LabTAU, Inserm, Université Lyon 1, Lyon, France

Département de médecine interne, Division de la santé et des maladies cardiovasculaires, Université de Cincinnati, Centre cardiovasculaire 3935, 231 Albert Sabin Way, Cincinnati, OH, 45267-0586, États-Unis

Sonya R. Kennedy, Maxime Lafond, Kevin J. Haworth, Daniel Suarez Escudero & Christy K. Holland

Département de génie biomédical, Université de Cincinnati, Cincinnati, OH, États-Unis

Sonya R. Kennedy, Kevin J. Haworth et Christy K. Holland

Département de radio-oncologie, Collège de médecine, Université de Cincinnati, Cincinnati, OH, États-Unis

Dan Ionascu

Département de médecine interne, Centre des sciences de la santé de l'Université du Texas à Houston, Houston, TX, États-Unis

Brion Frierson, Shaoling Huang, Melvin E. Klegerman, Tao Peng et David D. McPherson

Boston Scientific, Maple Grove, MN, États-Unis

Curtis Genstler

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

ML, KJH, CG, DDM et CKH ont contribué à la conception expérimentale. SH, MEK et TP ont fabriqué l'OFP-PAFb-PGN-ELIP. SRK, KJH et CKH ont acquis des données PCI et de pression hydrodynamique. SRK et CKH ont acquis des données de distribution de taille et d'atténuation. BF a acquis les données de dosage de la pioglitazone. DI, CKH et SRK ont acquis et examiné des images SLIM. ML, KJH et DSE ont écrit les scripts de traitement PCI. SRK et CKH ont rédigé le manuscrit qui a été édité par tous les coauteurs.

Correspondance avec Christy K. Holland.

Boston Scientific a fourni l'unité de contrôle et les cathéters du système endovasculaire EkoSonic. CG est un employé à la retraite et actionnaire de Boston Scientific Inc, et CKH et KJH sont consultants auprès de Boston Scientific Inc. SH, MEK et DDM sont actionnaires et membres du conseil d'administration de Zymo Pharmaceuticals, LLC. Tous les autres co-auteurs n'ont aucun conflit d'intérêts à divulguer.

Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Vidéo supplémentaire 1.

Vidéo supplémentaire 2.

Vidéo supplémentaire 3.

Vidéo supplémentaire 4.

Libre accès Cet article est sous licence Creative Commons Attribution 4.0 International, qui autorise l'utilisation, le partage, l'adaptation, la distribution et la reproduction sur tout support ou format, à condition que vous accordiez le crédit approprié à l'auteur ou aux auteurs originaux et à la source, fournissez un lien vers la licence Creative Commons et indiquez si des modifications ont été apportées. Les images ou tout autre matériel de tiers dans cet article sont inclus dans la licence Creative Commons de l'article, sauf indication contraire dans une ligne de crédit au matériel. Si le matériel n'est pas inclus dans la licence Creative Commons de l'article et que votre utilisation prévue n'est pas autorisée par la réglementation légale ou dépasse l'utilisation autorisée, vous devrez obtenir l'autorisation directement du détenteur des droits d'auteur. Pour voir une copie de cette licence, visitez http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Réimpressions et autorisations

Kennedy, SR, Lafond, M., Haworth, KJ et al. Initiation et imagerie de la cavitation à partir d'agents de contraste d'écho infusés à travers le cathéter EkoSonic. Sci Rep 13, 6191 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-33164-5

Télécharger la citation

Reçu : 20 septembre 2022

Accepté : 07 avril 2023

Publié: 16 avril 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-023-33164-5

Toute personne avec qui vous partagez le lien suivant pourra lire ce contenu :

Désolé, aucun lien partageable n'est actuellement disponible pour cet article.

Fourni par l'initiative de partage de contenu Springer Nature SharedIt

En soumettant un commentaire, vous acceptez de respecter nos conditions d'utilisation et nos directives communautaires. Si vous trouvez quelque chose d'abusif ou qui ne respecte pas nos conditions ou directives, veuillez le signaler comme inapproprié.

Nouvelles