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Nov 12, 2023

Phénol

Rapports scientifiques volume 11, Numéro d'article : 23883 (2021) Citer cet article

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La rose de Damas est une source bien établie et abondante de composés phytochimiques, ainsi qu'une huile essentielle économiquement importante, mais sa culture est exigeante et coûteuse. Dans cet article, des extraits de quatre matières premières végétales - Salvia officinalis, Sambucus nigra, Matricaria chamomilla, Calendula officinalis, connues pour être riches en composés phénoliques, mais aussi beaucoup plus faciles à cultiver - ont été directement comparés à ceux obtenus à partir de Rosa × damascena Mill. En combinant diverses méthodologies d'extraction (dans un appareil Soxhlet, assisté par ultra-ondes et assisté par micro-ondes, utilisant du CO2 supercritique) et des essais in vitro complémentaires (piégeage des radicaux, réduction du fer, Folin-Ciocalteau et complexation Al3+), il a été possible d'approximer et de comparer les portefeuilles phytochimiques de ces diverses plantes. En tenant compte des rendements des cultures de différentes espèces, des conclusions économiquement importantes peuvent être tirées - le souci (C. officinalis) semblant être le substitut le plus viable de la rose de Damas comme source de composés phénoliques. Des analyses d'acides gras et de microéléments ont également été réalisées, afin d'enrichir davantage les profils chimiques des extraits de plantes. L'article vise également à rassembler et à reconcevoir plusieurs tests colorimétriques fréquemment utilisés lors de l'étude d'extraits de plantes in vitro, mais critiqués pour leur manque de corrélation avec l'activité in vivo. Nous montrons qu'elles restent un outil viable pour la comparaison directe des méthodologies d'extraction, tout en soulignant leurs lacunes.

La rose de Damas (Rosa × damascena Mill., RD) est l'une des sources de composés phytochimiques les plus connues et les plus populaires. Des études s'accordent à dire que les extraits de rose ont de très fortes propriétés anti-radicaux libres (par rapport à d'autres plantes), qui sont corrélées à la teneur en composés phénoliques1. À ce jour, l'acide gallique, l'acide syryngique, la quercétine, le kaempférol et l'épicatéchine ont été identifiés dans les pétales de rose de Damas2,3. Ils contiennent également des terpènes, des glycosides et des anthocyanes, des acides carboxyliques, de la vitamine C, des tanins et des composés lipidiques, notamment des acides gras polyinsaturés (AGPI) et des huiles essentielles4,5. Les composés phénoliques présents dans la rose de Damas (par exemple, l'épicatéchine) ont une activité antioxydante et anticollagénase6,7. Il est également rapporté que la fraction phénolique extraite de la rose de Damas présente un puissant effet anti-hyperpigmentation8.

La rose de Damas est une plante cultivée. Il est cultivé principalement sur la côte méditerranéenne, bien que la plupart des cultures soient situées dans la vallée des roses, en Bulgarie. Cette espèce nécessite une humidité de l'air élevée, des températures modérées et est assez exigeante en termes de qualité du sol et d'eau9. Les pétales sont généralement cueillis à la main en raison de leur extraordinaire délicatesse. Tout cela fait de la rose de Damas une plante exigeante et difficile à cultiver, et donc les produits dérivés de la rose restent chers. Pour cette raison, le but de cette étude était de trouver une source alternative de composés phénoliques et d'autres composés bioactifs parmi les espèces communes de plantes herbacées (en Europe et dans le monde), qui seraient plus facilement disponibles et moins chères à cultiver. Bien que des méthodes spécifiques basées sur des normes soient cruciales pour déterminer de petites différences dans les produits chimiques individuels présents dans des espèces végétales étroitement apparentées, et même entre des cultivars10, une approche plus générale a été jugée nécessaire pour cribler diverses matières premières pour des quantités appréciables de groupes phénoliques spécifiques et d'autres composés phytochimiques utiles. . Les plantes étudiées dans ce travail ont été sélectionnées non seulement pour leur prévalence, mais aussi pour leur utilisation courante comme herbes, épices et agents aromatisants, ainsi que dans certains nutraceutiques.

Le sureau (Sambucus nigra, SN) est un arbuste que l'on trouve couramment dans toute l'Europe, l'Asie centrale, les Amériques et l'Afrique du Nord. Elle pousse à l'état sauvage, mais il est également possible de trouver des cultivars de cette espèce11. Le sureau est l'une des plus anciennes plantes utilisées en médecine, comme en témoignent les fouilles de l'âge de pierre, indiquant une utilisation précoce des fleurs et des fruits à des fins thérapeutiques12. Les fleurs contiennent de grandes quantités de flavonoïdes, tels que le kaempférol, l'astragaline, la quercétine, la quercétine-3-O-glucoside, la rutine, l'isoquercétine et l'hyperoside13, et les acides phénoliques, c'est-à-dire les acides férulique, gallique, chlorogénique, syryngique et p-coumarique14,15. Les autres métabolites secondaires sont principalement des triterpènes (par exemple, α- et β-amirine, acide ursolique et oléanique) et des stérols, tels que le campestérol, le β-sitostérol et le sigmasterol. Les fleurs de sureau contiennent des pectines, des tanins et des quantités infimes d'huile essentielle, qui comprend des cétones, des alcools, des esters, des oxydes et des terpènes13. Les polyphénols obtenus à partir de cette matière première montrent la capacité d'absorber le rayonnement UV, réduisant sa pénétration dans les couches profondes de la peau, prévenant ainsi les coups de soleil et les dommages à l'ADN16.

Le souci de pot (Calendula officinalis, CO) est probablement originaire de la Méditerranée, où on le trouve encore dans les habitats naturels17. Il est cultivé dans de nombreux pays du monde, et parfois aussi sous sa forme sauvage (éphémérophyte). Bien qu'il ait déjà été utilisé à des fins thérapeutiques dans l'Antiquité, il est encore utilisé dans la phytothérapie moderne, principalement dans le cas de brûlures, de varices, d'ulcères, de jaunisse et de problèmes de peau18,19. Parmi les composés les plus abondants dans le souci, on trouve des composés phénoliques (y compris les acides p-hydroxybenzoïque, salicylique, caféique et gallique, ainsi que des flavonoïdes acylés, des O-glycosides et des flavonoïdes méthoxylés) et des saponines20. Le souci contient également des caroténoïdes et des alcools triterpéniques, à la fois sous leur forme libre et estérifiée, et des AGPI, tels que l'acide calendique17, et des protéines, des acides aminés, des alcaloïdes, des tanins, des hydrocarbures saturés, des polysaccharides de haut poids moléculaire, de la vitamine C et des minéraux20,21. C. officinalis peut également être une source d'huile essentielle, dont environ 25 % est de l'α-cadinol22.

Les extraits de fleurs de Calendula officinalis peuvent être utilisés dans le traitement de l'inflammation et des plaies cutanées en raison de ses fortes propriétés antimicrobiennes et de son activité antifongique23,24. Des études suggèrent également que les extraits de souci peuvent être bénéfiques pour la cicatrisation de la peau et la synthèse du procollagène25.

La camomille (Matricaria chamomilla, MC) pousse à l'état sauvage presque dans tout l'hémisphère nord (Europe, Amérique du Nord et Asie), et même en Australie26 ; il a également trouvé comme plante cultivée. La camomille était utilisée dans la médecine populaire depuis l'Antiquité : pour soigner les plaies, les contusions, les brûlures, les migraines et aussi pour soulager les cauchemars, l'insomnie et comme sédatif léger27. À des fins thérapeutiques, des capitules sont collectés. Dans les fleurs de camomille, plus de 120 composants chimiques ont été identifiés comme métabolites secondaires, notamment des terpénoïdes, des flavonoïdes et d'autres composés ayant une activité pharmacologique potentielle28. Il s'agit notamment des acides férulique, caféique, vanillique, protocatéchuique, p-coumarinique, o-coumarinique et chlorogénique29. À leur tour, les flavonoïdes suivants sont dominants : l'apigénine, la quercétine, la patulétine, la lutéoline et leurs glycosides30. Les têtes de camomille sont également une source d'huile essentielle, qui contient un composé bleu caractéristique, le chamazulène, qui est synthétisé à partir du précurseur incolore de sesquiterpène, la matricine31,32. La camomille est l'une des sources naturelles les plus riches en apigénine, qui influence un certain nombre de processus cellulaires, notamment la production de cytokines et la réponse inflammatoire33.

La sauge commune (Salvia officinalis, SO) est un sous-arbuste originaire de la Méditerranée, mais elle est actuellement cultivée dans toute l'Europe, y compris dans les pays du nord, comme la Norvège et la Finlande ; on trouve également des plantations de sauge en Amérique du Nord et en Afrique34,35,36. C'est une matière première précieuse en phytothérapie, en alimentation et en cosmétique. La sauge était un symbole de santé et de longévité déjà dans l'Antiquité et est largement utilisée comme plante médicinale, recommandée pour les affections liées à la pharyngite, l'amygdalite et la gingivite, ainsi que pour d'autres affections inflammatoires de la cavité buccale37,38,39.

Différents types d'extraits riches en diterpènes (carnosol, acide carnosique, triterpènes (ex. acide ursolique, acide oléanique), flavonoïdes (ex. dérivés méthylés de l'apigénine et de la lutéoline) et acides phénoliques sont obtenus à partir de la sauge40. La sauge commune contient de grandes quantités d'acide rosmarinique ( qui, avec le carnosol et l'acide carnosique, possède les propriétés antioxydantes les plus fortes parmi tous les produits chimiques identifiés dans les plantes du genre Salvia) 41, 42. Comme pour les autres acides phénoliques couramment trouvés dans les plantes herbacées, comme l'acide gallique et l'acide férulique, la sauge n'en contient que de petites quantités 39. La sauge contient également des vitamines, notamment de la vitamine C43, et de l'huile essentielle44.

L'acide rosmarinique protège contre les effets nocifs des rayons UV et des ROS, présente une activité antioxydante, anti-inflammatoire, antiproliférative, antibactérienne et même antivirale in vitro45,46. Le carnosol est responsable des propriétés antioxydantes et anti-inflammatoires des extraits de sauge. À son tour, l'acide carnosique a des effets antimicrobiens et antiobésité42.

Cet article explore les similitudes, les différences et la viabilité commerciale des plantes présentées ci-dessus comme sources d'extraits riches en phytochimiques. À cette fin, quatre tests spectrophotométriques semi-qualitatifs, fréquemment utilisés séparément lors de l'étude des activités d'extraits de plantes in vitro, ont été utilisés en conjonction avec quatre méthodologies d'extraction populaires : extraction Soxhlet (SOX), extraction assistée par ultrasons (UAE) et micro-ondes. (MAE), ainsi que l'extraction au CO2 supercritique (SFE). Malgré les critiques récentes visant les soi-disant «essais antioxydants in vitro» - car ils sont mal corrélés à l'activité in vivo - lorsqu'ils sont combinés, ils ont permis un profilage chimique robuste des plantes sélectionnées. Repensés de cette manière, ils peuvent devenir un outil viable et efficace pour déterminer le meilleur protocole d'extraction pour un objectif ou un groupe phytochimique donné, même lorsqu'une gamme variée d'échantillons de biomasse doit être analysée. Nos recherches ont été complétées par des analyses de microéléments et d'acides gras des extraits obtenus, afin de fournir une vision plus complète des espèces étudiées en tant que sources de produits chimiques importants pour les industries alimentaires, cosmétiques et même pharmaceutiques.

Quatre méthodes d'extraction de la biomasse végétale couramment rencontrées ont été choisies pour l'étude et leurs rendements comparés (Fig. 1). Chacun a été utilisé d'une manière adaptée à leurs forces particulières. L'extraction la plus longue, la plus énergivore avec un solvant bouillant dans un appareil Soxhlet, d'une durée de 24 h (SOX) peut être considérée comme une référence pour d'autres méthodes, théoriquement plus douces et/ou plus rapides. Il a été possible d'isoler la quasi-totalité des composés extractibles (solubles dans l'éthanol) pendant la durée fixée : de 44 % de la masse de l'échantillon en cas de RD à 13 % pour le SO.

Rendements d'extraits préparés à l'aide de différentes méthodologies, exprimés en (a) pourcentage de matière végétale sèche utilisée et (b) fraction d'efficacité d'extraction obtenue pour les pétales de rose de Damas, en utilisant les mêmes conditions d'extraction. Les barres d'erreur représentent un écart type (extractions effectuées en triple).

Les extractions assistées par ultrasons (UAE) et assistées par micro-ondes (MAE) sont deux méthodes qui devraient assurer une meilleure pénétration du solvant dans la matière extraite, raccourcissant en théorie la période d'induction et donc l'ensemble du processus47. Avec un quart du temps d'extraction SOX (c'est-à-dire 3 h), les rendements étaient extrêmement similaires pour les deux méthodes, variant de 27 % pour RD-MAE à 7 % avec SO-UAE. Comme les baisses de rendements étaient universellement bien inférieures aux baisses des temps d'extraction, on peut conclure que les EAU et les MAE présentent des alternatives viables et plus rapides aux méthodes d'extraction traditionnelles et chronophages.

L'extraction par fluide supercritique (SFE) gagne de plus en plus en popularité, car elle correspond le mieux à la tendance croissante de la chimie verte48. En particulier, le CO2 en tant que solvant offre d'énormes avantages, car il est bon marché, non toxique et facile à recycler. Cependant, la nature strictement non polaire du CO2 limite la teneur des extraits SFE, sauf si un co-solvant est utilisé. Même alors, la flexibilité de la méthode est entravée, comme le montrent les faibles rendements obtenus : de 10 % pour RD à seulement 2 % pour MC (après 1 h). On peut donc conclure que les espèces végétales sélectionnées pour cette étude contiennent principalement des composants extractibles polaires ou modérément polaires, qui peuvent être isolés avec succès à l'aide d'éthanol, mais pas de CO2 supercritique (à l'exception possible du SO, comme discuté plus loin).

Les rendements d'extraction universellement faibles obtenus pour la sauge s'expliquent par la nature de la matière première elle-même : en l'occurrence, la biomasse provient de l'ensemble de la plante, c'est-à-dire à la fois des feuilles et des tiges. Ces derniers contiennent notamment des quantités élevées de lignocellulose, ce qui augmente le poids de la matière première, tout en réduisant la quantité de composés actifs extractibles. Cette mauvaise performance est compensée plus tard, lorsque la viabilité économique des cultures de SO est discutée.

Outre les résultats quantitatifs de l'extraction de différents matériaux végétaux, lors de la recherche de sources de biomasse riches en phytochimiques, la qualité des extraits doit également être évaluée. Au stade initial, où une grande variété de plantes et de protocoles d'extraction sont analysés, les méthodes très chronophages et coûteuses comme la chromatographie peuvent être inutiles ; il en va de même lorsqu'un matériel végétal est bien documenté, mais que l'optimisation du procédé est en cours. Les soi-disant « dosages d'antioxydants in vitro », comme les méthodes ABTS, FRAP, Folin–Ciocalteau (FC) et flavonol-Al3+ (FL-Al), bien que populaires49, ont récemment soulevé des inquiétudes, certains auteurs affirmant une corrélation ( aujourd'hui pour la plupart réfutées) entre leurs résultats et l'activité in vivo50. Utilisés ensemble, ils constituent cependant un outil efficace pour estimer le profil phytochimique des extraits végétaux. Cette batterie de déterminations spectrophotométriques simples et rapides nous a permis de tirer des conclusions générales concernant les quantités relatives de différents composés redox-actifs, tels que les polyphénols, les vitamines et les caroténoïdes.

Les dosages augmentent en sélectivité dans l'ordre dans lequel ils ont été mentionnés, ce qui est assez conforme aux résultats numériquement décroissants qui ont été obtenus pour la plupart des échantillons (Fig. 2). Alors que les méthodes ABTS et FRAP sont couramment utilisées de manière interchangeable - en théorie, elles sont toutes deux capables de mesurer la capacité d'un composé à piéger les radicaux libres in vitro par n'importe quel moyen chimique - leurs mécanismes diffèrent, le second étant basé sur la réduction des ions Fe3+. Les déterminations effectuées pour les besoins de cette étude révèlent des écarts importants, en particulier lors de la comparaison des résultats pour les extraits de C. officinalis obtenus par les méthodes SOX et SFE (comparer les figures 2 et 3). Dans ce dernier cas, l'activité réductrice de FRAP mesurée est négligeable, ce qui contredit les résultats de la méthode ABTS. Cela conduit à la conclusion que la méthode FRAP est beaucoup moins sensible à la présence de rétinoïdes, qui sont présents en concentration élevée dans le CO, et on peut s'attendre à ce qu'ils soient particulièrement abondants dans le CO-SFE. Dans le cas des extraits de sauge, aucune différence significative n'a été observée entre ces deux extraits, ce qui signifie que les composés antiradicalaires non polaires présents dans le SO n'appartiennent pas au groupe des rétinoïdes.

Comparaison des activités de différents extraits dans tous les dosages colorimétriques, indiquées en milligrammes d'équivalents de la norme appropriée par gramme de (a) extrait pur ou (b) matière végétale brute (voir "Matériels et méthodes" et Matériel supplémentaire pour plus de détails). Les barres d'erreur sont omises pour plus de clarté. Tous les résultats (en triple pour chaque extrait) étaient à ± 5 % les uns des autres.

Corrélation entre les tests FRAP et ABTS, montrant une interdépendance forte, mais évidemment non linéaire. De plus, le test FRAP semble être beaucoup moins sensible aux composés de type rétinoïde, comme en témoigne la position largement hors tendance détenue par l'extrait SFE riche en lipides obtenu à partir de Calendula officinalis (préparé à l'aide de CO2 supercritique).

Les détails et la justification du profilage phytochimique des matières végétales et de leurs extraits sont décrits ci-dessous, séparément pour chacune des espèces.

Les extraits de rose de Damas, comme prévu, contenaient la concentration la plus élevée de composés actifs redox (résultats obtenus à partir des dosages ABTS et FRAP les plus généraux) dans les extraits obtenus par toutes les méthodes, à l'exception de SFE (Fig. 2). Cela suggère que la rose de Damas contient la plus grande quantité d'antioxydants in vitro polaires ou modérément polaires (qui peuvent être extraits à l'aide d'éthanol) et en même temps relativement peu de composés non polaires capables de piéger les radicaux, tels que la vitamine E et les rétinoïdes. La détermination de la teneur en phénols à l'aide de la méthode FC montre qu'ils comprennent en effet une très grande partie des composés phytochimiques extractibles contenus dans la rose de Damas (les extraits de rose ont à nouveau montré les activités les plus élevées, parmi tous les extraits examinés), ce qui est cohérent avec la littérature2. Cependant, ce matériau contient relativement peu de flavonols - ou ils existent sous des formes hautement saccharifiées, qui montrent une activité plus faible dans le dosage FL-Al (ils sont également plus polaires, mais toujours visibles en utilisant la méthode ABTS). Alors que le rendement de RD-SFE était 2 à 5 fois plus élevé que celui d'autres extraits de SFE, en combinaison avec ses activités de dosage et sa teneur en acides gras toutes deux faibles (Fig. 4a), cela indique une teneur substantielle en huile essentielle (qui est, de même, bien documenté dans la littérature)4.

Informations complémentaires concernant la composition chimique des extraits végétaux obtenus par différentes méthodes. (a) Quantité d'acides gras saturés et insaturés. (b) Quantité de microéléments. Les barres d'erreur sont omises pour plus de clarté. Tous les résultats (en triple pour chaque extrait) étaient à ± 5 % les uns des autres. Des données précises et tabularisées sont disponibles dans le matériel supplémentaire.

Les fleurs de sureau contiennent de grandes quantités de composés phénoliques (l'activité des extraits dans le test FC est la deuxième après la rose de Damas dans la plupart des cas, et même la plus élevée dans le cas des extraits de MAE - voir Fig. 2), dont les flavonoïdes sont présents en quantité modérée. (ce qui peut être conclu après avoir comparé les résultats des dosages FL-Al et FC) - qui reste également conforme aux attentes13. Ces flavonoïdes sont cependant facilement extraits, comme le montrent les résultats obtenus pour le SN-UAE et le SN-SFE. Le faible rendement total du SN-SFE, associé à sa forte teneur en acides gras et en flavonoïdes, laisse peu de place à l'huile essentielle, ce qui est également soutenu par la littérature13. En dehors de cela, les données suggèrent un profil phénolique similaire à celui observé pour la rose de Damas ; alors que les extraits de sureau contiennent moins de composés phénoliques totaux, ils restent globalement en deuxième position.

En revanche, les résultats des dosages et l'efficacité de l'extraction de C. officinalis suggèrent que la teneur en rétinoïdes de ce matériel végétal est sensiblement élevée. Des activités comparables de piégeage des radicaux in vitro du CO-SOX et du CO-SFE indiquent qu'une quantité importante de composés redox-actifs contenus dans le calendula sont non polaires. En comparant ces connaissances avec les résultats des déterminations FRAP, on peut affirmer sans risque que ces composés sont principalement des rétinoïdes et des dérivés polyinsaturés similaires51. Il convient également de prêter attention aux résultats obtenus pour le CO à partir du test ABTS. Alors que les extraits d'éthanol de souci ne possèdent pas une activité de piégeage exceptionnelle, le CO-SFE présente en fait une activité similaire à celle du CO-SOX. On peut donc conclure que la plupart des composés redox-actifs trouvés dans cette plante sont bien des composés de faible polarité. En dehors d'eux, l'acide calendique présent dans le souci (un acide gras qui présente des propriétés antioxydantes)17 ajoute également à la forte activité du CO-SFE. De plus, sur la base du rendement élevé de l'extraction SFE et de la teneur mesurée en acides gras, une grande fraction de composés lipidiques dans le calendula est également évidente. Dans le cas des antioxydants polaires in vitro, ils sont proportionnellement peu nombreux : les composés phénoliques avec une proportion importante de flavonoïdes constituent la majorité de ce groupe. Il convient également de prêter attention aux résultats de la détermination de la teneur en flavonoïdes par la méthode FL-Al. Considéré conjointement avec les résultats obtenus par la méthode de Folin-Ciocalteau, le CO peut être considéré comme une source particulièrement riche en flavonols. Toutes ces observations sont cohérentes avec les données de la littérature21.

Parmi toutes les plantes étudiées, seul le MC-SOX a été obtenu avec un rendement proche de celui du RD-SOX (Fig. 1b). Les premiers ont montré des activités plus faibles dans les tests ABTS et FRAP (bien que plus élevées que C. officinalis et S. officinalis) avec des composés phénoliques constituant une quantité significative d'extractibles - ce qui peut être conclu sur la base des résultats du test FC, et qui est à nouveau cohérent avec la littérature52. Les flavonols constituent un groupe assez restreint parmi les composés phénoliques de la camomille, et les données de la littérature montrent que l'apigénine (qui fonctionne mal dans le test FL-Al) est le flavonoïde le plus abondant dans la camomille30. Sur la base du faible rendement de MC-SFE et des résultats des activités de dosage colorimétrique qu'il montre, on peut conclure que la teneur en composés actifs redox non polaires dans la camomille est assez faible. Les principaux composants des extraits SFE sont les acides gras (Fig. 4a) et l'huile essentielle, dont un constituant particulièrement intéressant, le chamazulène, peut être responsable d'une certaine activité montrée dans la méthode ABTS.

Les extraits d'éthanol de sauge ont été obtenus avec les rendements les plus faibles parmi toutes les matières premières testées, tandis que l'extrait SO-SFE a été obtenu avec le deuxième plus élevé, après RD-SFE. Les résultats des déterminations ABTS et FRAP pour le SO-SOX étaient parmi les plus bas, alors que dans le cas du SO-SFE, ils étaient en fait les plus élevés. Aucune différence significative n'a été observée entre les résultats de ces deux tests, ce qui signifie que les composés antiradicalaires non polaires présents dans le SO n'appartiennent pas au groupe des rétinoïdes. Dans ce cas, les résultats du dosage FC suggèrent que les composés phénoliques constituaient une grande partie des composés phytochimiques et étaient en fait dominants dans le SO-SFE. Toutes ces données (ainsi que les résultats des déterminations d'acides gras) suggèrent que la sauge contient beaucoup de composés actifs redox non polaires, principalement phénoliques. Ceci est à nouveau fortement validé par la littérature existante, qui indique une teneur très élevée en carnosol, ainsi qu'en acides carnolique et rosmarinique dans les extraits de sauge41. Ces composés peuvent se présenter dans la plante sous forme d'aglycones, ce qui les rend facilement extractibles avec un solvant non polaire, tel que le CO2 supercritique. De plus, sur la base des résultats de la méthode complexométrique avec Al3+, on peut supposer sans risque que la sauge a une teneur relativement élevée en flavonoïdes (flavonols), qui représentent une grande proportion des composés phénoliques mentionnés ci-dessus, malgré leur SO-SOX global plus faible. concentration.

Afin d'étoffer le profil chimique des extraits végétaux, la concentration de cinq éléments (sodium, zinc, fer, cuivre et chrome) a également été déterminée (Fig. 4b). Il convient de noter que, bien que faiblement concentrés, ces ions métalliques ne pouvaient apparaître dans les extraits éthanoliques que sous forme de complexes organiques et autres conjugués lipophiles, connus pour leur grande mobilité transdermique et leur biodisponibilité53.

Les extraits de calendula et de camomille se sont avérés les plus riches en sodium (~ 0,05 et ~ 0,03 mg/g, respectivement). Le sodium est essentiel pour maintenir le potentiel membranaire et le volume des cellules corporelles (Na+/K+-ATPase, dite pompe sodium-potassium), stimuler les nerfs et les muscles, et la pression osmotique correcte des fluides corporels54.

La rose de Damas, en revanche, s'est révélée être une bonne source de fer (> 0,05 mg/g d'extrait). Les extraits de calendula contenaient également des quantités importantes de fer (~ 0,024 mg/g), et des quantités légèrement inférieures de cet élément étaient présentes dans les extraits de sauge et de camomille (~ 0,01 mg/g). L'hème contenant du fer agit comme un cofacteur des protéines de l'hémoglobine et de la myoglobine, qui jouent toutes deux le rôle de transporteurs d'oxygène dans le corps55.

Les microéléments restants étaient présents dans les plantes testées en quantités négligeables. Les résultats exacts des déterminations peuvent être trouvés dans le matériel supplémentaire.

Sur la base des données disponibles de la littérature28,31,56,57,58,59,60,61,62,63,64, une tentative a été faite pour convertir les rendements de cultures rapportés de plantes sélectionnées en quantité de différents phytochimiques/activités in vitro qui pourraient être obtenu par hectare. Les auteurs tiennent à souligner que les valeurs données (Fig. 5) doivent être traitées comme des approximations grossières, en raison des grandes différences dans les rendements déclarés des cultures de différentes parties du monde. Néanmoins, certaines conclusions importantes et intéressantes peuvent être tirées des données.

Rendements potentiels de composés bioactifs, exprimés en équivalents kilogrammes de la norme appropriée (voir "Matériels et méthodes" pour plus de détails), par hectare d'une culture donnée. Les barres verticales indiquent la gamme des rendements possibles, tels que calculés à l'aide des rendements des cultures rapportés dans la littérature des cinq plantes testées.

Compte tenu de la teneur totale de tous les piégeurs de radicaux in vitro, la plus grande quantité peut être obtenue à partir d'un hectare de culture de roses de Damas. Étonnamment, cependant, la deuxième place est occupée par la sauge (25 à 40 % de l'activité totale de piégeage fournie par le RD-SOX obtenu à partir de la même zone de culture). Il convient également de noter qu'en termes de production d'extraits SFE, les cultures de S. officinalis offrent des rendements jusqu'à 60 fois supérieurs à ceux pouvant être obtenus à partir d'autres plantes étudiées.

Lorsque l'on considère les matières végétales sélectionnées comme sources potentielles de composés phénoliques seuls (dosage FC), C. officinalis est la culture la plus productive; il en est de même lorsque seuls les flavonoïdes/flavonols sont pris en compte. En termes d'obtention de ces composés, la culture de la camomille et de la sauge peut également s'avérer un investissement intéressant (les flavonoïdes des extraits de souci en pot représentent environ 30% de ceux du calendula, calculés par hectare). Il convient également de mentionner la grande quantité d'acides gras dans les inflorescences et les graines de calendula et de camomille17, lorsqu'elle est calculée par hectare. Bien que les extraits de baies de sureau aient montré des activités in vitro élevées (juste après RD), leur obtention à partir de cultures peut ne pas être aussi rentable. Il convient de mentionner, cependant, que les buissons de sureau sont utilisés pour obtenir à la fois des fleurs (au printemps) et des fruits (en automne). Bien que selon les sources de la littérature, ces derniers aient une teneur plus faible en composés phénoliques, ils sont une source précieuse de vitamine C et d'anthocyanes14,65. Le SN est également peu exigeant et facile à cultiver, et les fleurs peuvent également être obtenues à partir de plantes poussant couramment à l'état sauvage, même à l'échelle industrielle.

Les plantes herbacées sont une source riche et variée de composés phytochimiques, y compris des composés phénoliques et d'autres composés redox-actifs, qui sont en forte demande dans les industries alimentaires, nutraceutiques et cosmétiques. Pour équilibrer les besoins industriels, économiques et écologiques, de nouvelles sources végétales doivent être analysées pour leur potentiel à fournir ces composés phytochimiques, et le traitement de la biomasse d'espèces bien connues doit être optimisé. À cette fin, une batterie d'essais spectrophotométriques semi-quantitatifs bien connus a été compilée et repensée comme un outil efficace pour le criblage et le profilage des matières végétales et de leurs extraits. Combinée aux rendements obtenus avec quatre méthodologies d'extraction, ainsi qu'aux données d'études de plantation, une nouvelle approche pour comparer diverses cultures (et leurs méthodes de traitement optimales) a été établie.

Sans équivoque, les rendements d'extraction les plus élevés et les résultats des tests in vitro ont été obtenus pour les extraits de rose de Damas. Cependant, si l'on tient compte de la culture de plantes testées en termes de composés phénoliques obtenus, les cultures de soucis en pot deviennent en fait les plus précieuses. Cette espèce contient en outre des quantités importantes d'acides gras et de rétinoïdes importants. Un peu moins efficace serait la culture de la camomille (qui est pourtant une source précieuse d'apigénine) et de la sauge (extrêmement riche en acide rosmarinique) - cette dernière étant l'option la plus économique pour la production d'extraits au CO2 supercritique "vert". En fait, en raison des avancées technologiques et des incitations à l'élimination du dioxyde de carbone atmosphérique, ce type d'extraction est en passe de devenir le plus évolutif et le plus efficace dans un avenir proche. Des cinq plantes étudiées, la moins productive, en termes de kilogrammes de composés phénoliques obtenus par hectare, semble être la culture du sureau, bien que les extraits obtenus à partir de cette matière première aient montré la deuxième activité la plus élevée (après la rose de Damas) dans tout le pays. les dosages effectués. Il convient de rappeler, cependant, que les récoltes de buissons de sureau peuvent être obtenues deux fois par an - au printemps (fleurs) et en automne (fruits); cette plante est également très facile à cultiver et commune à l'état sauvage.

En résumé, si la rose reste la source la plus riche en composés phénoliques et en molécules redox-actives, compte tenu de l'efficacité et des aspects économiques de sa culture, il existe en effet des cultures moins exigeantes, moins chères à cultiver et plus accessibles disponibles comme substituts viables. Salvia officinalis, Sambucus nigra, Matricaria chamomilla et Calendula officinalis peuvent tous être considérés comme des sources précieuses d'extraits bioactifs pour les industries alimentaires et cosmétiques, et sous certains aspects - ou lorsqu'ils sont obtenus dans des conditions spécifiques - peuvent même surpasser le "gold standard" établi par le rose de Damas. Malgré les critiques croissantes des "tests antioxydants in vitro", ils restent un outil précieux pour discerner les profils phytochimiques et optimiser le traitement de la biomasse. Au lieu de les rejeter, leurs défauts devraient être mieux étudiés et les méthodes elles-mêmes développées davantage, afin que leur place dans les sciences végétales puisse être pleinement réalisée, sans être surestimée.

Cinq types de matériel végétal ont été étudiés : pétales de rose de Damas séchés (RD), capitules de camomille séchés (MC), fleurs de calendula séchées (CO), fleurs de sureau séchées (SN) et herbe de sauge entière séchée et coupée (SO). Toutes les matières premières ont été achetées auprès de fournisseurs locaux qualifiés (Pologne), à ​​l'exception de la rose de Damas (importée de Rose Valley, Bulgarie). L'étude est conforme aux directives locales et nationales.

L'éthanol a été utilisé comme solvant d'extraction (96 %, pureté spéciale, Avantor). Les autres solvants étaient de qualité analytique ou supérieure (Merck). De plus, les réactifs suivants ont été utilisés dans les dosages colorimétriques : réactif de Folin–Ciocalteau (qualité analytique ; Merck), carbonate de sodium (> 99 % ; Avantor), persulfate de potassium (> 99 % ; Merck), 2,2'-azino- Sel de diammonium de l'acide bis(3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique) (ABTS ; > 98 % ; Merck), 2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine (> 98 % ; Merck), Al(NO3 )3 · 9H2O (> 99,9 % ; Merck) et comme étalons de référence : acide gallique (> 99 % ; Merck), quercétine (≥ 95 % par HPLC ; Merck) et 6-hydroxy-2,5,7,8-tétraméthylchromane Acide -2-carboxylique ("Trolox" ; > 97 % ; Merck). Pour la détermination des acides gras et l'analyse élémentaire, les réactifs suivants ont été utilisés : éther méthylique de t-butyle (> 99,8 %), hydroxyde de triméthylsulfonium (0,25 M dans le méthanol), undécanoate de méthyle (99 %), ester méthylique d'acide gras de matériau de référence certifié. (FAME) Étalon, acide chlorhydrique (37 %), acide nitrique (70 %) et étalons d'éléments (potassium, calcium, magnésium, sodium, chrome, fer, zinc, cuivre, argent, cobalt). Tous les réactifs ont été achetés chez Merck.

Environ 20 g (dans le cas de la sauge et du sureau) ou environ 10 g (dans le cas du calendula, de la camomille et de la rose de Damas) de matière végétale sèche non broyée ont été utilisés pour l'extraction. Le procédé a été réalisé pendant 24 h dans un dé à coudre en cellulose, dans un appareil de 250 mL en utilisant 300 mL d'éthanol. Les extraits ont été filtrés à chaud et évaporés jusqu'à poids constant sous pression réduite.

Pour effectuer l'extraction assistée par ultrasons, 20 g de fleurs de sauge et de sureau séchées et 10 g de fleurs de calendula, de camomille et de rose de Damas ont été pesés. Le matériel végétal a été transféré dans des flacons à fond rond séparés et recouvert de 300 ml d'éthanol. L'extraction a été réalisée dans un bain à ultrasons (Sonic 10, Polsonic, Pologne) à 40–45 ° C pendant 3 h. Les extraits alcooliques sont filtrés et évaporés à poids constant sous pression réduite.

Afin d'effectuer l'extraction, environ 2 g de sauge et de sureau séchés et environ 1 g de rose de Damas séchée, de camomille et de calendula ont été pesés. Les échantillons ont été transférés dans des bombes en téflon, auxquelles 30 ml d'éthanol ont été ajoutés. La procédure d'extraction a été réalisée dans un four à micro-ondes (MARSXpress, CEM, USA) à une température de 40 °C (avec une puissance de 400 W) pendant 180 min. Les extraits ont été filtrés et évaporés jusqu'à poids constant.

Pour effectuer l'extraction, environ 4 g de sureau séché, 1,2 g de calendula séché, 1,3 g de rose de Damas séchée, 2 g de camomille séchée et 3,2 g de sauge séchée ont été pesés. Les matières premières pesées ont été transférées dans des cartouches d'extraction, qui ont été placées dans un appareil d'extraction de fluide supercritique (MV-10 ASFE, Waters, USA). Les paramètres de départ du procédé étaient de 50 °C et 200 bar. L'extraction a été réalisée dans ces conditions pendant 60 min. Les débits de CO2 et de co-solvant (éthanol) étaient respectivement de 8 mL/min et 0,8 mL/min. Les extraits obtenus sont évaporés jusqu'à poids constant sous pression réduite.

Dans tous les cas, les méthodes connues et couramment utilisées ont été modifiées afin de mieux les adapter à la spécificité des recherches menées, des équipements, ainsi que pour améliorer leur reproductibilité66,67,68,69. Toutes les analyses ont été réalisées au moins en triple.

Typiquement, une solution à 10 mg/mL d'un extrait sec de plante donné dans du méthanol a été utilisée. Dans les cas où l'absorbance de l'un des échantillons était supérieure à 1 UA (ou inférieure à 0,15 UA dans le cas du test ABTS), les déterminations ont été répétées en utilisant une solution d'extrait de plante diluée au 1/10 (c'est-à-dire 1 mg/mL, 0,1 mg/ mL).

Des blancs pour chaque détermination ont été réalisés en parallèle des échantillons, en utilisant du méthanol pur à la place de l'extrait de plante. Pour les échantillons colorés, l'absorbance de fond a été mesurée de la même manière, en remplaçant le réactif approprié par de l'eau.

De plus, dans le cas des extraits de calendula et de camomille, en raison de la teneur élevée en composés lipophiles, le tétrahydrofurane (THF) a été utilisé comme solvant au lieu du méthanol. La non activité du THF dans tous les dosages a été vérifiée au préalable.

Toutes les déterminations ont été effectuées sur un spectrophotomètre Jenway 7415 (Cole-Parmer, UK).

Le réactif de dosage a été préparé en mélangeant 1,5 ml de solution ABTS pré-préparée (14 mM dans H2O, c'est-à-dire 38,4 mg dans 5 ml) et 1,5 ml de solution de persulfate de potassium (7 mM dans H2O, c'est-à-dire 33,8 mg dans 25 ml) dans un flacon fermé à bouchon à vis et laissé dans l'obscurité à température ambiante pendant 14 à 20 h. Au bout de ce temps, le réactif de dosage a été dilué à un volume de 200 mL. L'absorbance de la solution doit être comprise entre 0,775 ± 0,025 UA. Les déterminations ont été faites en mélangeant 3 mL du réactif et 100 μL de solutions méthanoliques d'extraits végétaux secs. Après cela, le mélange a été laissé dans l'obscurité pendant exactement 6 min, suivi d'une mesure d'absorbance à 734 nm. Les valeurs d'absorbance obtenues doivent se situer dans la plage de 0,15 à 0,70 UA. La capacité de piégeage des radicaux libres de l'échantillon est calculée à partir de la formule suivante :

Où : %I—pourcentage d'inhibition, A0—absorbance de l'échantillon blanc, As—absorbance de l'échantillon.

Une courbe standard a été préparée en remplaçant la solution d'extrait par une solution méthanolique de Trolox à concentration variable (0,15, 0,12, 0,09, 0,06, 0,03 mg/mL).

Pour préparer le réactif, un tampon acétate 300 mM (3,0 g de CH3COONa et 4,1 mL de CH3COOH conc. pour 250 mL), une solution 10 mM de tripyridyltriazine (TPTZ) dans HCl (75 mg de TPTZ et 86 uL de HCl 36% pour 25 mL) et une solution 20 mM de FeCl3·6H2O (135 mg pour 25 mL) ont été préparés. Le jour de l'analyse, les solutions de tampon acétate, TPTZ et FeCl3 ont été combinées dans un rapport 10:1:1 (v/v/v) pour obtenir le réactif FRAP, qui a été placé dans un bain chauffant (37 °C) pendant environ 10 à 15 minutes avant utilisation. Pour la détermination, 3,2 mL de réactif chaud, 200 μL de méthanol et 100 μL de solution méthanolique d'extrait de plante ont été mélangés et laissés pendant 4 min dans un flacon à bouchon à vis fermé. Après ce temps, l'absorbance des échantillons a été mesurée à 593 nm (la couleur est plus stable que dans le cas du dosage ABTS).

Différents volumes (20, 40, 60, 80, 100, 120, 140 μL) d'une solution aqueuse de FeSO4·7H2O (1 mM, 27,2 mg dans 100 mL H2O) et de méthanol (s'ajoutant au volume total de 300 μL ajouté à 3,2 ml de réactif FRAP) ont été utilisés pour préparer la courbe standard.

Les déterminations ont été effectuées en mélangeant 2,5 ml d'un réactif standard de Folin-Ciocalteau dilué au 1/10 et 100 µl d'une solution méthanolique d'extrait de plante dans un flacon à bouchon à vis de 4 ml. Après 30 s, 0,5 ml de Na2CO3 aqueux à 20 % a été ajouté à la solution, et elle a été laissée pendant 2 h dans l'obscurité, après quoi l'absorbance a été mesurée à 760 nm. La courbe standard a été préparée en utilisant de l'acide gallique (0,20, 0,16, 0,12, 0,08, 0,04, 0,02 mg/mL dans du méthanol).

Le réactif utilisé pour les déterminations était une solution aqueuse de Al(NO3)3·9H2O (57 mg/mL). Les échantillons pour les mesures ont été préparés en mélangeant 900 µL de méthanol, 100 µL de solutions méthanoliques d'extraits de plantes et 1 mL de solution de réactif, agités et laissés pendant 5 min. Les mesures d'absorbance ont été effectuées à 420 nm (la couleur est stable pendant 1 à 2 h ; il faut veiller à ce que l'absorbance se situe dans la plage de 0,1 à 1,0 UA). De plus, il convient de noter que de nombreux extraits de plantes ont une couleur jaunâtre inhérente, ce qui rend obligatoires les mesures d'absorption de fond pour ce test (malgré les fortes dilutions utilisées).

La quercétine a été utilisée comme standard (solutions avec des concentrations comprises entre 0,015 et 0,150 mg/mL). Les mesures ont été effectuées de la même manière que dans le cas des échantillons d'extraits, à l'exception du remplacement de leurs solutions méthanoliques par des solutions étalons différentes.

Des échantillons d'extrait sec pesant de 9 à 15 mg ont été utilisés pour l'analyse. Aux échantillons de matériaux, 0,5 ml de t-butyl méthyl éther, 0,25 ml de solution d'hydroxyde de triméthylsulfonium (0,25 M dans du méthanol) et 25 μl d'étalon interne (undécanoate de méthyle ; 105 mg dans 10 ml de t-butyl méthyl éther) ont été ajoutés . Les analyses ont été réalisées à l'aide d'un chromatographe en phase gazeuse Varian 450-GC (Agilent Technologies, USA).

L'identification des esters méthyliques d'acides gras (FAME) a ​​été réalisée en comparant les temps de rétention des échantillons avec les temps de rétention des étalons. La teneur en acides gras a été calculée en pourcentage de la masse de l'échantillon (des informations détaillées sont disponibles dans le matériel supplémentaire).

L'analyse d'importants micro- et macroéléments (potassium, calcium, magnésium, sodium, chrome, fer, zinc, cuivre, argent, cobalt) dans des extraits secs de plantes a été réalisée à l'aide de la spectrométrie d'émission optique à plasma à couplage inductif (appareil Quantima Sequential, GBC, Australie ), après minéralisation préalable des échantillons à l'aide d'un mélange d'acides chlorhydrique et nitrique (minéralisateur micro-ondes Magnum II, ERTEC, Pologne).

La courbe d'étalonnage a été préparée en mesurant l'émission de solutions étalons d'éléments aux concentrations suivantes : 1 mg/L, 2 mg/L et 5 mg/L, et l'échantillon blanc.

Les détails de l'analyse peuvent être trouvés dans le matériel supplémentaire.

Pétales de rose de Damas séchés

Têtes de fleurs de camomille séchées

Fleurs de calendula séchées

Fleurs de sureau séchées

Herbe de sauge entière séchée et coupée

Extraction Soxhlet

Extraction par solvant assistée par ultrasons

Extraction par solvant assistée par micro-ondes

Extraction de dioxyde de carbone supercritique

Extrait obtenu à partir de pétales de rose de Damas séchés, à l'aide d'un appareil d'extraction Soxhlet

Essai de piégeage des radicaux, basé sur la réaction avec le sel de diammonium de 2,2'-azino-bis(acide 3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique)

Paramètre antioxydant réduisant les ions ferriques, basé sur la réaction avec la 2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine

Dosage de Folin–Ciocalteau, teneur en phénols totaux déterminant la méthode colorimétrique

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Le travail a été réalisé en partie grâce à un financement du National Science Center, Pologne Grant No 2018/31/B/NZ8/00280 (Bénéficiaire de la subvention : Radosław Pankiewicz).

Faculté de chimie, Université Adam Mickiewicz de Poznań, Uniwersytet Poznańskiego 8, 61-614, Poznań, Pologne

Zuzanna Piotrowicz, Łukasz Tabisz, Marta Waligórska, Radoslaw Pankiewicz & Boguslawa Łęska

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ZP : conceptualisation, méthodologie, investigation, rédaction—projet original, rédaction—manuscrit révisé Ł.T. : méthodologie, validation, rédaction—projet original, rédaction—manuscrit révisé, supervision. MW : logiciel, analyse formelle, visualisation. RP : conceptualisation, ressources, acquisition de financement. B.Ł. : conceptualisation, supervision, administration de projet. Tous les auteurs ont examiné le manuscrit.

La correspondance est Łukasz Tabisz.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

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Réimpressions et autorisations

Piotrowicz, Z., Tabisz, Ł., Waligórska, M. et al. Alternatives riches en phénols pour Rosa x damascena Mill. Profilage phytochimique efficace utilisant différentes méthodes d'extraction et dosages colorimétriques. Sci Rep 11, 23883 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-03337-1

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Reçu : 27 septembre 2021

Accepté : 29 novembre 2021

Publié: 13 décembre 2021

DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-021-03337-1

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